Control de calidad

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3. GRÁFICAS DE CONTROL EXTERNO DE CALIDAD EN EL LABORATORIO ¨Otra forma de procesar estadísticamente los resultados remitidos para su valoración, consiste en la realización de una GRÁFICA DE CONVERGENCIA BIDIRECCIONAL DE YOUDEN, que se usa cuando se estudian dos controles con distinta concentración de analito. ¨El diagrama de Youden, al representar valores normales y anormales, necesita que se empleen dos niveles de controles. ¨Esta gráfica se construye de la siguiente forma: ¤Se envían a los laboratorios participantes dos controles con distinta concentración del analito. ¤Se calcula la media y la desviación típica de los resultados obtenidos por todos los laboratorios a partir de cada uno de los controles. ¤Se representan en ordenadas, los valores de la media, de la media ± 1 DE, de la media ± 2 DE y de la media ± 3 DE, calculados a partir de los resultados obtenidos en uno de los controles. ¤Se representan en abscisas, los valores de la media, de la media ± 1 DE, de la media ± 2 DE y de la media ± 3 DE, calculados a partir de los resultados obtenidos en el otro de los controles.¤Se prolongan todos los valores anteriores mediante líneas que se interceptan entre sí mismas formando tres cuadrados concéntricos.E) EVALUACIÓN Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN DE LOS RESULTADOS. ¨Diariamente, antes de iniciar el trabajo, se debe verificar si el analizador está en condiciones óptimas de trabajo. Se deberá ver si está bien calibrado, si tiene algún defecto técnico, el estado de los reactivos y soluciones, etc. Si todo nos parece correcto iniciaremos el trabajo. ¨En muchos laboratorios en primer lugar se analizan los controles. ¨La evaluación interna de los resultados - gráficas de Levey-Jennings - consiste en un análisis de los mismos, que se debe realizar todos los días, en el laboratorio donde se ejecutan las determinaciones. Si los resultados están fuera de control, las muestras de los pacientes no se cuantifican hasta que el instrumento o sistema son puestos en control.¨Así pues, el estudio de las gráficas de Levey-Jennings prmite detectar errores sistemáticos (cuando hay un desplazamiento o una tendencia de los valores al alza o a la baja)y, por tanto, una disminución en la precisión, pero no errores aleatorios, que se producen imprevisiblemente. Éstos se observan cuando se repiten resultados significativamente anormales. ¨Sin embargo, para la TOMA DE DECISIONES encaminadas al rechazo de valores, se prefiere utilizar la MULTIRREGLA DE WESTGARD. En esta multirregla, la circunstancia desencadenante de la inspección de los resultados del control es la superación, por parte del control, del valor de la media más o menos dos desviaciones estándar. ¨Se considera que el sistema analítico está fuera de control cuando, junto con la anterior, se encuentra alguna otra de las siguientes circunstancias anómalas: ¤ El último valor supera la media ± 3 DE. ¤ Dos valores consecutivos superan la media ± 2 DE. ¤ Entre dos valores consecutivos hay una diferencia mayor que ± 4 DE. ¤ Cuatro valores consecutivos superan la media ± 1 DE. ¤ Diez valores consecutivos están todos por encima o todos por debajo de la media. ¨ Mientras que las circunstancias 1 y 3 sugieren la existencia de un error aleatorio, las circunstancias 2, 4 y 5 sugieren la presencia de un error sistemático. ¨ Si el sistema analítico está fuera de control, no deben ser considerados validos los valores obtenidos en las muestras y se tiene que actuar para remediar esta situación.¨Antes de actuar para remediar una falta de control analítico, se puede repetir el análisis con el mismo control, con otro control y con una muestra estudiada previamente. Si, al hacer esto, los resultados se corrigen, se consideran válidos los valores obtenidos en las muestras. .-.-.-.-.-.-.-.-.-.- ¨Lo primero es ver si no supera los límites de alarma (regla 1 : 3 DS), si la respuesta es si entonces se debe detener el sistema, se le considera fuera de control y se rechaza la prueba. ¨Se sigue verificando si el punto no es el segundo en caer por encima del mismo límite de precaución (regla 2 : 2 DS), o bien si la distancia con la medición de control anterior, no supera los 4 DS (regla R : 4 DS). Cada vez que la respuesta sea si, el sistema de medición se detiene. ¨La otra cuestión es ver si no se ha violado la regla 4 : 1 DS, esto es que no sea el cuarto punto seguido en caer por encima de 1 DS, del mismo lado. ¨Por último se debe verificar que no sea el décimo (o noveno) punto en caer por encima, o por debajo de la media (regla 10 : media). ¨Si la respuesta sigue siendo no, entonces se considera al sistema bajo control hasta la próxima medición de control

 TEMA1: ANALÍTICA DE PARÁMETROS BIOLÓGICOS POR ESPECTROFOTOMETRÍA:1. INTRODUCCIÓN:La ESPECTROSCOPIA, estudia la capacidad que poseen las moléculas para absorber y emitir determinadas radiaciones electromagnéticas.Basándose en estas propiedades, se emplean diversos métodos espectroscópicos para identificar y/o cuantificar en muestras biológicas, los parámetros biológicos indicadores del estado fisiológico o patológico del individuo. . Los MÉTODOS ÓPTICOS DE ANÁLISIS QUÍMICO se definen como aquellos que miden la radiación electromagnética que emana o interactúa con la materia.Los métodos ópticos se dividen en espectroscópicos y no espectroscópicos. .Los MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS miden: .La radiación absorbida por átomos, moléculas o iones y se conocen como métodos espectroscópicos de absorción; según sea la radiación absorbida, se conocen como métodos de absorción de rayos X, absorción en el ultravioleta, absorción en el visible, absorción infrarroja, etc..La radiación emitida por los átomos, moléculas o iones, entonces se denominan métodos espectroscópicos de emisión y según sea la radiación emitida se conocen como métodos de emisión de rayos X, fluorescencia atómica, fluorescencia molecular, fosforescencia que pueden ocurrir en el visible o ultravioleta. .Los NO ESPECTROSCÓPICOS miden cambios en la dirección de la propagación de la luz, entre ellos tenemos la refractometría, la polarimetría y las medidas de reflactancia entre otros. -.-.-.-.-.-.-.-.-.. En el laboratorio de bioquímica, muchos de los métodos que se utilizan para identificar y/o cuantificar una sustancia se basan en medir la intensidad del color del analito, es decir se establece una relación directamente proporcional entre la cantidad del analito disuelto por unidad de volumen (concentración) y la intensidad de color de la disolución, son los denominados MÉTODOS COLORIMÉTRICOS.-.-..-.-La espectrofotometría engloba las técnicas cuantitativas, de análisis químico que utilizan la luz para medir la concentración de las sustancias químicas. En función del color del analito, variará el tipo de radiación electromagnética absorbida y/o emitida, a su vez en función de la intensidad de su color, se puede establecer una correlación con la concentración de analito presente en la muestra, a mayor intensidad mayor concentración . Los métodos espectrofotométricos de análisis son los más utilizados en el laboratorio de bioquímica para determinar las concentraciones de gran número de sustancias y para la medida de actividades enzimáticas. .En los laboratorios de análisis clínicos (LAC) se utiliza fundamentalmente la espectrofotometría de absorción molecular del ultravioleta y visible - las moléculas absorben, de forma selectiva, radiaciones cuyas longitudes de onda pertenecen a la región del ultravioleta (200-340 nm) y al espectro visible (340-700 nm)-.2. NATURALEZA DE LA LUZ.CONCEPTOS PREVIOS. .La luz es una radiación electromagnética -un tipo de energía radiante junto con los rayos X, las transmisiones de radio y televisión…- que se transmite por medio de cuantos de energía o fotones -paquetes discontinuos de energía que tienen una pequeñísima masa- que se desplazan con un movimiento ondulatorio. La interacción de un campo eléctrico y otro magnético (que cambian en el tiempo) originan una perturbación electromagnética que permite a los fotones propagarse de una región a otra del espacio (aunque no haya materia en la región) mediante un movimiento ondulatorio..-.-.-.La cantidad mínima de energía de la luz u otra radiación electromagnética se denomina fotón. La energía de un fotón viene dada por la ecuación: E = h . V.Dónde h es la constante de Planck (6,62 . 10-27 erg/s) y V la frecuencia. . Como radiación electromagnética, la luz viene definida por los siguientes parámetros: .CICLO: Es la mínima porción no repetitiva de la onda..LONGITUD DE ONDA (Y,reves.-lambda): Se define como la distancia entre dos máximos de un ciclo completo del movimiento ondulatorio y representa en línea recta la longitud de un ciclo.-.-También se define como la distancia entre dos puntos que se encuentran en el mismo estado de vibración. Se mide en nanómetros (1nm: 10-9m) para las radiaciones visible y ultravioleta, en Angstroms para los rayos X (1 A: 10-10m) y en micrómetros (1µm: 10-6 m) para las infrarrojas. .FRECUENCIA (V): Es el número de ciclos realizado por unidad de tiempo, generalmente un segundo. Emplea como unidad de medida el s-1, también llamado Hertz o hercio. Estos dos parámetros, V y Yreves, son inversamente proporcionales y se relacionan según la siguiente fórmula: Yreves = c / V Siendo c la velocidad a la que las ondas electromagnéticas se desplazan en el vacío, aproximadamente 300.000 km/s. .PERÍODO (T): Es el tiempo, en segundos, que tarda una partícula en realizar un ciclo completo. T=1/V. .AMPLITUD (A): Está relacionada con la altura de la onda según el eje de ordenadas..-.-.-Existe una correspondencia entre algunos parámetros de las ondas y las características físicas de la radiación. Así, por ejemplo: .-.-.El color de la radiación se asocia con su longitud de onda (o con su frecuencia), de tal manera que cada color del espectro visible corresponde a una determinada longitud de onda. .-.-.La intensidad de la radiación, es decir, lo fuerte o tenue que se percibe el color se asocia con la amplitud. .-.-.La energía de un fotón depende de su frecuencia y de su longitud de onda. La energía de las radiaciones electromagnéticas es inversamente proporcional a la longitud de onda de la radiación (cuando menor longitud de onda las radiaciones son más penetrantes, es decir, más energéticas) y, directamente proporcional a su frecuencia. E = h . V = h . c / Yreves. E = energia (erg) h = Constant de Planck (6,6256 · 10-27 ergs/s) c = Velocidad de la luz. 3.108 m/s .-.-.-.-.-Cuando las ondas electromagnéticas se ordenan de acuerdo con su frecuencia o su longitud de onda, la disposición ordenada se llama ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO.-.-.-El conjunto de radiaciones electromagnéticas se puede dividir en varias regiones o bandas espectrales según su longitud de onda o energía aunque no existen divisiones o límites estrictos para separar una región de otra en el espectro electromagnético. Los límites son arbitrarios y se han escogido de acuerdo con la instrumentación utilizada para su medición. La definición de cada región espectral ha sido establecida por Joint Committee on Nomenclature in Applied Spectroscopy.-.-.-.Por orden decreciente de frecuencias o creciente de longitudes de onda, el espectro electromagnético está formado por: Espectro electromagnético:1km->0,01 nm. television y radio->radar->inflarrojo->luz visible->ultravioleta->rayos X->rayos gamma.....rojo (700)->violeta(400).-.-.-.-.



La luz visible es la porción del espectro a la que el ojo humano es sensible, ocupa una banda delgada que se extiende generalmente desde 380nm hasta 780nm.-.-.- Las radiaciones electromagnéticas pueden tener ondas de una sola frecuencia (radiación simple o monocromática) o pueden estar formadas por ondas de diferentes frecuencias (radiación compleja o policromática).-.-.-. La luz solar -al igual que la emitida por un filamento de tungsteno- es la suma de todas las longitudes de onda correspondientes a las radiaciones del espectro visible; la que denominamos luz blanca. Si se hace pasar la luz blanca a través de un medio dispersador (prisma óptico), esta se descompone y se abre un espectro de colores que, en la región del visible, van desde el violeta al rojo.-.-.-.-.-.-.COLORES DE LA LUZ VISIBLE:dependiendo del color complementario, el que vemos, podemos saber el color que absorbe esa sustancia y, por tanto, la longitud de onda que debemos utilizar en espectrofometría. Por ejemplo, si la solución que hemos preparado presenta color rojo, absorberá más que ningún otro aquélla radiación cuya longitud de onda produzca color azul-verde. Por tanto, utilizaremos radiación de longitud de onda 495-505 nm. En el prospecto del Kit encontramos la longitud de onda que debemos utilizar en el espectrofotómetro para realizar la determinación (así como la temperatura y demás condiciones necesarias en esa determinación en concreto).3. INTERACCIÓN LUZ Y MATERIA:.Los átomos y las moléculas sólo pueden presentar determinados niveles energéticos definidos por: .Configuración electrónica: Los electrones ocupan alrededor del núcleo determinados niveles energéticos que definen los orbitales característicos de cada tipo de átomo. .Disposición espacial: En las moléculas, los electrones que forman parte de los enlaces covalentes, se localizan alrededor de los dos centros atómicos en lo que se conoce como orbitales moleculares. -.-.-.-Además, los átomos de las moléculas están en constante movimiento de rotación y vibración.-.-.-.-Cuando incide sobre la materia una energía en forma de radiación se pueden producir determinadas transiciones electrónicas de unos orbitales a otros alterando sus niveles energéticos.-.-.-.Puesto que cada partícula (átomo o molécula) sólo puede presentar unos determinados niveles energéticos -definidos por su configuración electrónica y estado vibracional y rotacional-, la absorción o emisión de energía radiante únicamente puede realizarse mediante fotones de una frecuencia específica única y común para todos los átomos o moléculas de la misma especie; concretamente cuando la energía de esos fotones coincide con la diferencia de energía entre alguno de sus niveles electrónicos. Este comportamiento de la materia permite aplicar las técnicas espectroscópicas en el análisis de parámetros en muestras biológicas.-.-.-.- Cuando un haz de luz interacciona sobre la materia se pueden dar 2 fenómenos: que la materia absorba energía o bien que emita energía.3.1.-PROCESO DE ABSORCIÓN DE ENERGÍA:Los electrones ocupan unos orbitales característicos para cada tipo de átomo con unos niveles energéticos determinados. Cuando un átomo se encuentra en su estado de menor energía o estado fundamental o de reposo (A0), su configuración electrónica es estable y, si ésta es alterada, tiende a recuperarla.-.-.-.-. Si una radiación cuya energía es compatible con el paso de los electrones del estado fundamental al excitado, incide sobre los átomos en estado de reposo, estos absorberán la energía produciéndose un desplazamiento de los electrones a orbitales más energéticos y, por tanto, menos estables pasando el átomo a un estado excitado (A*).-.-.-.-.La tendencia de los átomos es a recuperar su estado fundamental, menos energético y más estable; para ello deben EMITIR la energía previamente absorbida.-.-.-.-.-.-.En la partícula se producen cambios que dependen de las características de la partícula (tipo de enlaces, etc.) y de la energía (longitud de onda) de la luz que interacciona. Los cambios que pueden producirse son: --Transición de electrón a un nivel electrónico superior.--Cambios vibracionales en los enlaces covalentes.--Cambios rotacionales en los enlaces covalentes.-.-.-.-.La partícula en estado excitado tiende a regresar espontáneamente a su estado fundamental,desprendiendo la energía absorbida.-.-.-.-.-.Cada especie absorbente (cromógeno) tiene un espectro de absorción característico. Este espectro expresa la relación existente entre la longitud de onda incidente y la absorbancia que presenta una solución del cromógeno en unas condiciones de trabajo determinadas.-.-.-.-.Los espectros de absorción son útiles en espectrofotometría para seleccionar la longitud de onda para la cual la absorbancia es máxima -determinaciones cuantitativas- o para identificar al parámetro -determinaciones cualitativas-.-.-.-. Si representamos en un eje de coordenadas la absorbancia -ordenadas- frente a las longitudes de onda - abscisas- obtenemos un gráfico denominado espectro de absorción del cromógeno y nos permite conocer la longitud de onda a la que la absorción es máxima.-.-.-.-.La medida de la cantidad de luz absorbida por una solución coloreada, es el fundamento en que se basan algunas técnicas espectroscópicas, en concreto la espectrofotometría de absorción molecular.-.-.-.-. Cuando un rayo luminoso con una energía de magnitud E incide sobre un recipiente de vidrio que contenga un líquido coloreado, ocurre que: 1.Una parte es reflejada regularmente (E1).2.Otra parte es difundida o dispersada, es decir reflejada en todas direcciones (E2).3.Otra parte es absorbida por las propias moléculas en disolución (E3).4.Finalmente la energía restante emerge del cuerpo, es decir, se transmite, ( E4).3.1.-PROCESO DE EMISION:El proceso de emisión se produce cuando los átomos o moléculas, previamente excitados,vuelven a su estado fundamental cediendo su exceso de energía en forma de radiación electromagnética de distinta longitud de onda a la energía de excitación y que podemos cuantificar.-.-.-.-. Partícula en estado de reposo A0 + Energía de excitación E = h. v1 ->Partícula en estado excitado A* ->(espontaneamente)->Energía de emisión E = h. v2 ->Partícula en estado fundamental A0.-.-.-.Los espectros de emisión son característicos de cada elemento o molécula. Los átomos emiten energía originando un espectro de líneas aisladas (pocas longitudes de onda), las moléculas emiten espectros continuos o de bandas. Estas líneas espectrales de longitud de onda característica servirán para identificar cualitativamente al elemento y por su intensidad determinarlo cuantitativamente.-.-.-. Por lo tanto podemos clasificar, las técnicas espectofotométricas en función de la interacción entre la luz y la materia según el siguiente cuadro: Técnicas de absorción:Espectrofotometría de absorción Espectroscopia de absorción atómica Dispersión Raman Nefelometría y turbidimetría. Técnicas de emisión:Espectroscopia de emisión Fotometría de llama. Fotoluminiscencia (fluorescencia y fosforescencia).4. ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN:Cuando la luz atraviesa un recipiente (tubo de ensayo o un recipiente de plástico o vidrio especial) cuyas paredes son totalmente transparentes, es decir, no reflejan ni difunden la luz, y que contiene un líquido de determinado color, éste, como cualquier sustancia, solo absorbe de una manera significativa una radiación monocromática concreta, es decir, que presenta una absorción selectiva para radiaciones de una determinada longitud de onda y permite el paso del resto de las radiaciones.-.-.-.La espectrofotometría de absorción consiste en la medida de la radiación que llega a un detector tras producirse el fenómeno de absorción de luz por parte de una sustancia absorbente (parámetro o analito).-.-.En la química clínica, el material de estudio es generalmente una solución, y las medidas se hacen ordinariamente dentro del espectro comprendido entre los 220 y los 800 nm.-.-.-. La espectrofotometría es muy utilizada hoy día debido a que este método presenta las siguientes características:--Sensibilidad relativamente alta.--Facilidad: determinaciones rápidas.--Especificidad relativamente alta.--Aplicable en autoanalizadores.-.-.-La ley de Lambert-Beer relaciona matemáticamente la intensidad de una radiación (Io) que incide sobre una cubeta que contiene una solución coloreada, con la intensidad de la radiación transmitida (It) después de que la radiación electromagnética atraviese la solución. .-.-La solución coloreada absorbe parte de la radiación incidente (Io) - de una . determinada - y el haz de luz que atraviesa la solución sale con una intensidad menor (It). Io = Ia + Id + It Io: radiación incidente -- Ia: radiación absorbida -- Id: radiación dispersada -- It: radiación trasmitida-.-.-.-Se denomina transmitancia a la relación entre la intensidad de la luz incidente y la transmitida. T = It / Io En la práctica se expresa como porcentaje de transmitancia: %T = It / Io x 100 -.-.-.-.La absorbancia representa la medida de la cantidad de radiación absorbida por el analito. .Si representamos gráficamente en un eje de coordenadas la relación entre ABSORBANCIAS Y CONCENTRACIONES, obtenemos una línea recta y la relación es directa; en cambio .si representamos %T FRENTE A LA CONCENTRACIÓN, obtenemos una curva y la relación es inversa, por lo que deberemos utilizar papel semilogarítmico para que se convierta en una recta.-.-.-.La absorbancia es la determinación que utilizamos en la práctica ya que la relación entre la transmitancia y la concentración de una disolución es inversa y logarítmica mientras que la relación entre la absorbancia y la concentración es directamente proporcional. A = log 1 / T -- .A = log 100 / % T -- .A = log 100 - log %T -- .A = 2 - log % T .De esta relación se deduce que la relación logarítmica entre A y % T se traduce en dos escalas: .% T va de 0 a 100 si % T = 100 A = 2 - log 100 = 0 . A va de infinito (8) a 0 si % T = 0 A = 2 - log 0 = 8 .-.-.-.La absorbancia es una medida ADIMENSIONAL y su valor oscila entre 0 e 8(infinito). Normalmente es una magnitud que se encuentra entre 0 y 1 y todos los aparatos aprecian hasta la milésima.-.-.-.La relación entre tansmitancia y absorbancia sería también: .A = log 1 / T -- .A = - log T -- .A = - log It / Io -- .A = log Io / It .-.-.-.En los espectrofotómetros los % de transmitancias son transformadas en absorbancias, pero recordar que la absorbancia, en si misma, NO es una cantidad medible, sino que se obtiene por cálculo matemático a partir de los datos de transmitancia que mide el aparato.5.1. LEY DE LAMBERT-BEER .Lambert estudió la relación entre la intensidad luminosa de un haz incidente que atraviesa una placa coloreada y la intensidad luminosa del haz que sale transmitida. La ley de Lambert dice que la cantidad de luz absorbida por una solución es proporcional al espesor e intensidad de color de la solución.-.-.-.Así pues, la intensidad de la luz transmitida (It) de dos haces de luz de igual intensidad (Io) que atraviesen una solución de igual concentración y espesor, es la misma. Es decir, siempre se transmite lo mismo. Cuando el espesor de la placa coloreada aumenta en proporción aritmética, la intensidad de luz transmitida decrece en proporción geométrica, o lo que es lo mismo, entre el espesor de la placa coloreada (absorbente) y la intensidad de luz transmitida existe una relación logarítmica. -.-.-.

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