Conceptos y Reactivos Esenciales en Biología Molecular

Conceptos y Reactivos Clave en Biología Molecular

Este documento presenta definiciones y funciones esenciales de reactivos, enzimas y conceptos fundamentales utilizados en diversas técnicas de biología molecular, como la electroforesis.

Dodecilsulfato de Sodio (SDS)

Para desnaturalizar proteínas. Se utiliza en la preparación de proteínas para electroforesis en gel de poliacrilamida, rompiendo enlaces no covalentes en proteínas. Es un detergente.

Acrilamida/Bisacrilamida

Se usa en la síntesis de poliacrilamida. Actúa como terminador de la cadena en el proceso de polimerización.

Persulfato de Amonio/TEMED

Dona radicales necesarios para la polimerización de la acrilamida-bisacrilamida. Reacción que es acelerada por el TEMED.

Agarosa

Polisacárido formado por unidades de agarobiosa (alfa-L-galactopiranosa y beta-D-galactopiranosa). Extraído de algas de los géneros Gracilaria y Gelidium.

EDTA (Ácido Etilendiaminotetraacético)

Agente quelante. Tiene afinidad por los iones metálicos.

Fenol/Cloroformo/Alcohol Isoamílico

Usado para la limpieza de ADN.

Bromuro de Etidio

Agente intercalante usado como marcador de ácidos nucleicos.

Solución Salina Fisiológica

Se administra para corregir los volúmenes extracelulares.

ADN Polimerasa

Interviene en la replicación de ADN, participando en la elongación. Actúa como corrector y reparador por su actividad exonucleasa 3', que le da la capacidad de degradar el ADN.

ADN Ligasa

Forma enlaces covalentes entre el extremo 5' de una cadena polinucleotídica y el extremo 3' de otra cadena polinucleotídica. Su función es unir fragmentos (nuevos y antiguos).

Enzimas de Restricción (Ej: EcoRI, BamHI)

Son enzimas de reconocimiento de secuencias de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y cortan el ADN en ese punto concreto llamado "sitio o diana de restricción".

Lisozimas

Hidroliza el peptidoglucano de las paredes celulares bacterianas.

Función del Tampón de Carga

Se mezcla con el ADN. Dos de sus componentes, el glicerol y el azul de bromofenol, aumentan la densidad de la muestra para evitar que flote y asegurar que vaya al fondo del pocillo. También tiñe la muestra de azul para permitir el seguimiento visual durante la electroforesis.

Función del Tampón de Electroforesis

Ayuda en la transferencia de la corriente eléctrica desde un extremo al otro (polo opuesto). A la vez, ayuda a que el gel no se seque durante la prueba de electroforesis.

Función del Marcador de Peso Molecular

Es un patrón para medir el tamaño de ADN en bp (pares de bases). Este patrón contiene moléculas de ADN de longitudes conocidas que, al someterlas a electroforesis, sirven como referencia para comparar con otras moléculas de ADN.

¿Qué es un Marco de Lectura?

Es una secuencia de información genética que contiene los datos que se pueden utilizar para descifrar secuencias de aminoácidos (aa) y que se ensamblen en cadenas de polipeptídicas.

¿Qué es un Marco de Lectura Abierto (ORF)?

Es cada una de las secuencias de ADN comprendida entre el codón de inicio (AUG) de la traducción y un codón de terminación.