Análisis de componentes en extractos etéreos, etanólicos y acuosos

EXTRACTO ETÉREO

EXTRACTO ETÉREO

ALICUOTA “ A ”

1. Medir 10ml de extracto y evaporar hasta sequedad. Someter a destilación por arrate con vapor de agua. Extraer el destilado con 2x20 ml de éter. Aplicar una muestra sobre cropatoplaca de silicagel y hacer correr con un solvente (tolueno acetato de etilo 90:10 v/v: hexano-éter, 8:2). Revelar con solución de anisaldeido (mezcla H2SO4 concentrado-etanol) a 110 °C. Manchas coloridas indican presencia de ACEITES ESENCIALES.

• El resto de solución etanólica adicionar 10 ml de solución 0,5M de KOH y hervir a reflujo de 1-2 horas. Adicionar 20 ml de agua y extraer con 3x10 ml de éter. Dividir la fase etérea en dos porciones iguales y evaporar a sequedad. Uno de ellos disolver en 0.5 ml de anhídrido acético luego en 0,5 ml de cloroformo y 1ml de H2SO4 concentrado (reacción Liebermann-Burechard). La aparición de un anillo rojo-pardusco o violeta en la interfase indica la presencia de TRITERPENOS Y ESTEROLES.
• A la otra parte se agrega 2-3 gotas de reactivo Carr-Price. Los pigmentos son primeramente azul y luego verde. Con ácido sulfúrico concentrado aparece un color azul oscuro o azul verdoso, indica la presencia de CAROTENOIDES.
• Acidificar la fase acuosa con HCL (pH=3-4). Extraer con 2x10ml de éter. Evaporar la fase etérea hasta sequedad. Formación de residuo con cristales indica presencia de ÁCIDOS GRASOS.

ALICUOTA “ B ”

1. Medir 10 ml de extracto, evaporar hasta sequedad, disolver el residuo en 2 ml de al 2% (v/v) y diluir en 2 porciones iguales en tubos de ensayo. Adicionar a una de ellas 2-3 gotas de reactivo Mayer, sirviendo la segunda de patrón de comparación. La presencia de un precipitado blanco amarillento en el primer tubo indica presencia de ALCALOIDES.
2. Medir 5 ml de extracto y evaporar hasta sequedad y disolver el residuo en 2 ml de metanol caliente, adicionar limaduras de Mg y 1 ml de HCl CONCENTRADO (reacción de Shibatas). La aparición de color rojo anaranjado después de 10 min. Indica la presencia de FLAVONOIDES.
3. Medir 5 ml de extracto y evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo en 1 ml de solución de NH4OH al 25% (v/v) (reacción de Bortrangers). La aparición de color rojo indica la presencia de QUINONAS.
4. Medir 5 ml de extracto y evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo en 1 ml de agua hirviendo. Con un capilar aplicar 2 manchas sobre el papel filtro. Sobre una de las manchas aplicar una gota de solución 0.5 M de KOH (solución de amonio al 10%) observar a la luz UV 366 nm. La presencia de fluorescencia en las dos manchas, más intensa en la mancha tratada con KOH indica presencia de CUMARINAS.
5. Medir 5 ml de extracto y evaporar hasta sequedad. Efectuar la reacción de Lieberman Burchard, reacción positiva indica presencia de TRITERPENOS Y ESTEROLES.
6. Medir 5 ml de extracto y evaporar hasta sequedad. Adicionar 1-2 ml de cloroformo y 2-3 gotas de reactivo de Carr-PRICE. Reacción positiva indica presencia de CAROTENOIDES.

EXTRACTO ETANÓLICO ALICUOTA “ A ”

1. Medir 5 ml de extracto y agregar 2 ml de agua, luego adicionar 3-5 gotas de solución de FeCl3 al 1% (p/v). La aparición de color azul indica presencia de TANINOS HIDROLIZABLES. La coloración verde indica presencia, y rojo-ladrillo indica presencia de TANINOS CONDENSADOS.
2. Medir 10 ml de extracto y adicionar 5 ml de agua y 5 ml de solución de Fehling y calentar a reflujo por 30 minutos. La formación de un precipitado rojo ladrillo indica presencia de AZÚCARES REDUCTORES.
   1. Medir 20 ml de extracto y evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo en 10 ml de HCl al 10%. Filtrar, adicionar solución de NH4OH al 10% (pH=8-9) y extraer con éter. Evaporar la fase etérea y retomar el residuo en 1.5 ml de HCl al 2%. Dividir la solución en 2 tubos de ensayo, sirviendo uno de ellos como referencia, al otro agregar gotas de reactivo de Mayer. La aparición de un precipitado blanco-amarillento indica la presencia de ALCALOIDES.

ALICUOTA “ B ”

1. Examinar la coloración de la fase acuosa. Coloración rojo indica la posibilidad de presencia de antracenósidos y/o taninos catecólicos, alcalinizar el medio por la adición de solución de NH4OH. Modificación de la coloración indica la presencia de ANTOCIANÓSIDOS (GLUCOSILADOS).
2. Medir 4 ml de fase etérea y evaporar a sequedad, luego agregar 1-2 ml de solución de amonio al 25% (v/v) agitando (reacción de Bortrager). La aparición de color rojo-cereza indica la presencia de ANTRACENÓSIDOS.
3. Medir 5 ml de fase etérea y evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo en 1 ml de agua hirviendo, con un capilar aplicar 2 manchas sobre papel filtro, sobre una de las manchas aplicar una gota de solución 0.5 M de KOH (solución de amonio al 10%). Observar a la luz U.V 366 nm. La presencia de fluorescencia en las dos manchas, más intensa en la mancha tratada con KOH indica presencia de CUMARINAS.
4. Medir 5 ml de fase etérea y evaporar hasta sequedad. Efectuar la reacción de Liebermann Burchard. Reacción positiva indica presencia de TRITERPENOS Y ESTEROLES.

EXTRACTO ACUOSO

1. Medir 1 ml de solución, adicionar 1 a 2 ml de agua y 1-2 gotas de solución de lugol. El desarrollo de un color azul indica la presencia de ALMIDÓN.
2. Medir 2 ml de la solución, adicionar 10 ml de acetona y 5 gotas de hermatoxilina. Filtrar la aparición de precipitado violeta indica la presencia de MUCILAGOS.
3. Medir 5 ml de la solución, adicionar 2 gotas de reactivo de Fehling y hervir. La aparición de un precipitado de color rojo-ladrillo indica la presencia de AZÚCARES REDUCTORES.
4. Medir 1 ml de solución y agitar enérgicamente. La aparición de una espuma persistente y la reacción de Lieberman-Buchard positiva en la fracción hidrolizada indica presencia de SAPONINAS.
5. Medir 2 ml de la solución y evaporar hasta sequedad. Al residuo adicionar 2-3 gotas de H2SO4 concentrado y 3-4 gotas alcohólicas de timol. La aparición de color rojo indica presencia de POLISACARIDOS.
6. Medir 1 ml y efectuar la prueba de TANINOS.

Medir 15 ml de solución, adicionar solución de NH4OH al 10% hasta pH = 8-9 y extraer con 3x10 ml de éter. Separar la fase etérea y evaporar a sequedad y agregar 2 ml de solución de HCl al 10%. Dividir en 2 tubos de ensayo, sirviendo uno de ellos de testigo. A otro agregar 2-3 gotas de Mayer, la aparición de precipitado blanco-amarillento indica la presencia de ALCALOIDES.