Tipos y Fundamentos de las Líneas Celulares: De Cultivo Primario a Inmortalización

Fundamentos del Cultivo Celular

Cultivo Celular Primario

Para obtener un cultivo celular primario, la suspensión celular de partida se obtiene disgregando las células de un tejido por métodos mecánicos o enzimáticos. De esta manera se obtiene una mezcla celular compleja formada por los distintos tipos celulares presentes en el tejido. El cultivo primario se puede realizar a partir de esta mezcla o seleccionando un tipo celular concreto.

Cultivo Celular Secundario

La suspensión celular de partida se obtiene a partir de un cultivo primario o de otro secundario, mediante un subcultivo o “Pase”. También se puede obtener a partir de una línea celular mantenida en congelación.

El Pase Celular (Subcultivo)

El Pase de célula consiste en removerlas del recipiente original y sembrarlas en otros recipientes con unas condiciones apropiadas que aseguren el desarrollo de una nueva monocapa.

Línea Celular Primaria

La línea celular primaria es aquella obtenida a partir de un tejido u órgano mediante un cultivo primario y que se mantiene en cultivo mediante pases seriados durante un tiempo limitado.

• La población celular aumenta en cada pase (se multiplica el número de frascos de cultivo) y, normalmente, a partir del tercer pase se estabiliza.
• Esto significa que las células se hacen uniformes y homogéneas, manteniéndose las características morfológicas y fisiológicas estables durante las sucesivas generaciones.

Cuando el cultivo primario se realiza a partir de una mezcla celular compleja, el tipo celular con mayor tasa de crecimiento acaba desplazando a los demás, es decir, impidiendo el crecimiento de las células con tasas de crecimiento menores.

Senescencia Celular

Las líneas celulares primarias tienen una vida finita, es decir, se mantienen en crecimiento durante un número determinado de generaciones o pases, característico de cada tipo celular (suele oscilar entre 20 y 100) y después entran en la denominada fase de senescencia.

La fase de senescencia es la etapa vital en la que las células van perdiendo su capacidad de dividirse y el cultivo acaba muriendo. Esto es debido a que con las sucesivas divisiones los telómeros se acortan y las células van acumulando anomalías genéticas y perdiendo funciones.

Conservación de Líneas Primarias

Se puede conservar una línea celular primaria congelando células antes de alcanzar la senescencia y, a ser posible, en los primeros pases. En cualquier caso, hay que anotar siempre el número de pase del que proceden las células congeladas, para saber en todo momento aproximadamente cuántos pases le quedan antes de que el cultivo muera.

Línea Celular Continua

Las líneas celulares continuas son aquellas que se obtienen a partir de un cultivo primario y que se mantienen en cultivo por tiempo ilimitado mediante pases seriados.

Estas líneas aparecen espontáneamente en algunos cultivos, que se mantienen durante más pases de los esperados. Esto es debido a la aparición en el cultivo de células inmortales, capaces de originar líneas estables y permanentes. Aparecen como consecuencia de un fenómeno de transformación de las células normales, relacionado con la pérdida de los mecanismos de control celular.

Características de las Células Transformadas

Las células transformadas tienen unas características especiales:

• Crecen indefinidamente en cultivo (son inmortales).
• Pierden la dependencia del anclaje para crecer, por lo que pueden crecer en suspensión.
• Pierden la inhibición por contacto.
• Pueden invadir tejidos y producir tumores.
• Acumulan anomalías genéticas. Normalmente son aneuploides, con múltiples aberraciones cromosómicas.