Tipos de coloraciones en histología y sus factores determinantes

Tipos de coloraciones

Según el procedimiento de coloración:

• Coloración directa (simple) - se utiliza un solo colorante que tiñe todo el tejido en tonos variables del mismo color.
• Coloración indirecta - el colorante necesita de un mordiente para actuar.
• Coloración indirecta en un tiempo - el mordiente y el colorante están mezclados.
• Coloración indirecta en dos tiempos - el mordiente y el colorante se añaden por separado.
• Coloración negativa - no se tiñe la célula o el orgánulo, se tiñe todo lo demás.
• Coloración sucesiva - varios colorantes que se añaden sucesivamente.
• Coloración simultánea - varios colorantes que se añaden a la vez.
• Coloración progresiva - existe un control riguroso del tiempo de actuación y la coloración debe pararse en un determinado momento.
• Coloración regresiva - primero se sobrecolorea para luego eliminar el exceso mediante procedimientos de decoloración o diferenciación.
• Coloración terminal - no depende del tiempo de actuación.
• Coloración en bloque - se tiñe el tejido tras la fijación.
• Impregnación - no es una coloración en sentido estricto, es el depósito de precipitados de sales de metales pesados (oro, plata, osmio,...)

Factores de los que dependen la coloración:

1. Naturaleza del tejido: tejidos compactos y muchas células se tiñen mejor.
2. Grosor del corte: los cortes muy finos pueden tener sobrecoloración.
3. Fijación: fijador utilizado y la calidad de la fijación.
4. Calidad del colorante: distintas marcas, presencia de impurezas,...
5. "Caducidad"
6. Temperatura ambiente del laboratorio.

Tinción Hematoxilina-Eosina

Hematoxilina:

• Colorante BÁSICO
• Carga eléctrica positiva, colorante catiónico
• Tiñe sustancias ácidas, el núcleo (ARN, ADN)
• Las sustancias teñidas son basófilas
• Colorante natural, proviene palo Campeche
• En su forma natural no es un colorante, requiere un proceso de oxidación (maduración).
• Posteriormente se añade un mordiente (le aporta el carácter básico).
• Puede llevar distinto tipo de mordiente: aluminio, hierro, ácido fosfotungstico,...
• Según la composición, la hematoxilina recibe un nombre u otro (Harris, Mayer,...)

Eosina:

• Colorante ÁCIDO
• Carga eléctrica negativa, colorante aniónico
• Tiñe sustancias básicas, el citoplasma, matriz extracelular
• Las sustancias teñidas son acidófilas
• Color: azul, púrpura
• Color: rosa.
• Colorante débilmente ácido, derivado del xanteno 11. Eosina
• Molécula autofluorescente
• Se utiliza en solución acuosa o solución alcohólica al 1%
• Tiñe de color rosa a rojo
• Colorea el citoplasma, matriz extracelular, tejido conjuntivo, fibras colágeno,..

Tincion hematoxilina eosina:

En la coloración regresiva se realiza un exceso de tinción

Decoloración/ diferenciación con ácidos - Se baja el pH - La hematoxilina pierda afinidad y se pierde el exceso de tinción no selectiva - Etanol HCl al 1%

Azuleamiento/ Viraje - Se restituye el pH básico - Al subir el pH la Hx se vuelve azul de nuevo - Agua del grifo o agua con amoniaco (2%)

Coloración progresiva:

agua destilada, hematoxilina 3min, agua de grifo 5min, eosina solucion acuosa 1% 5 min, agua de grifo 5 min, deshidratacion, alcoholes y balsamo

Coloración regresiva:

Tras la hidratación - Hematoxilina 5-10 min - Lavar en agua del grifo varias veces - Alcohol clorhídrico 1% 5-30 sg - Lavar en agua del grifo 5 min - Eosina 30-60 sg - Lavar en agua del grifo 5 min.

Otras coloraciones histologicas comunes:

• Tricromo de masson - Coloración de fibras colágenas, fibrina, queratina. Tejido muscular y conjuntivo
• Distintos componentes: Hematoxilina de Weingert (Hx férrica) ,Fucsina ponceu, Ácido fosfomolíbdico, Azul de anilina, o verde luz
• Tinción policrómica
• Aplicaciones: Diagnóstico de distrofias musculares, patologías musculares, cardiacas, hepáticas (cirrosis), renales (fibrosis glomerular), tumores.
• Núcleo: azul-negro Citoplasma y fibras musculares: rojo- rosado Tejido conjuntivo: verde-azul Queratina: rojo Colageno: azul

Papanicolau:

• Extensiones citológicas, principalmente ginecológicas
• Tinción policrómica
• Distintos componentes: Hematoxilina, Eosina Azure 50, Orange G
• Aplicaciones: Definir el núcleo e identificar alteraciones nucleares Identificar estados de maduración y diferenciación celular