Tipos y Aplicaciones de la Centrifugación en el Laboratorio Clínico

Según su función:

• Microcentrífugas: De pequeño tamaño, pero alcanzan las velocidades más altas. Algunas además tienen refrigeración. Se usan para volúmenes muy pequeños de muestra, tipo eppendorf, y para técnicas de biología molecular.
• Citocentrífugas: Se usan para acelerar la sedimentación de células sobre portaobjetos. Se obtiene una muestra concentrada del líquido en estudio.
• Microhematocrito: Diseñadas para centrifugar a alta velocidad un capilar con sangre total y obtener el hematocrito sanguíneo. En desuso.

Tipos de Centrifugación

Centrifugación Analítica

No se suele usar en el laboratorio clínico. Su objetivo es medir las propiedades físicas de las partículas que sedimentan. Las aplicaciones son:

• Averiguar la pureza de un compuesto.
• Determinar la proporción relativa de sus componentes.
• Conocer e interpretar estructuras moleculares de diferentes compuestos.

Se parte de un volumen pequeño de una mezcla lo más pura posible y se centrifuga a velocidades muy altas. Se observan las moléculas mediante un sistema óptico. Los tubos de centrífuga deben ser de cuarzo para dejar pasar la luz visible y la ultravioleta.

Centrifugación Preparativa

Objetivo: separación de los componentes de una mezcla. Grandes volúmenes. Se emplea en el laboratorio clínico. Permite separar o adecuar la muestra para su posterior análisis. Existen dos tipos de centrifugación preparativa:

1. Centrifugación Preparativa Diferencial

Técnica más común. Se usa sobre todo para la sedimentación de células en sangre y orina.

Procedimiento:

• Se centrifuga la muestra a velocidad baja y se recoge el sobrenadante.
• Se centrifuga el sobrenadante a velocidad media y se recoge el sobrenadante.
• Se centrifuga el nuevo sobrenadante a velocidad alta.

Se obtiene un sobrenadante y tres precipitados con distintas densidades que corresponden a sustancias distintas.

2. Centrifugación Preparativa en Gradiente de Densidad

La muestra se deposita en un fluido con gradiente de densidad. Al centrifugar, las partículas se distribuyen en fracciones de diferentes densidades. Permite la separación de varios componentes de la muestra o de todos ellos, y la realización de medidas analíticas.

Implica la utilización de un soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior, con un gradiente de concentración.

La muestra se deposita en la parte superior como una fina banda y se presenta como diferentes bandas, que pueden ser separadas con pipeta o haciendo punción y recogiendo las fracciones por separado. El gradiente evita la mezcla de los componentes de la muestra. El gradiente se consigue con un soluto de baja masa molecular, de manera que la muestra que se va a analizar pueda ser suspendida en la solución resultante. Solutos que se usan: sacarosa, polisacáridos como el Ficoll y el Percoll, y sales de metales alcalinos como el cloruro de cesio.

El gradiente puede ser de dos tipos:

• Preformado: Se prepara antes de centrifugar. Puede ser:
  • Discontinuo o escalonado: Se depositan capas sucesivas de disolución, con concentraciones decrecientes.
  • Continuo: Se preparan dos disoluciones con distintas concentraciones y se colocan en un dispositivo formador de gradientes. Se obtiene un fluido con un gradiente continuo de concentración, que va desde la más alta hasta la más baja que se haya usado.