Técnicas de Tinción Histológica: Hierro, Citología y Hematoxilina-Eosina

Clasificación de las técnicas de determinación de hierro

El hierro férrico que teñimos se encuentra en médula ósea, bazo, hígado y ganglios linfáticos. El hierro en el organismo se puede encontrar de dos formas:

• Hierro en forma iónica: Se encuentra formando sales, normalmente en forma de cloruros o hidróxidos (iones ferrosos Fe²⁺ e iones férricos Fe³⁺).
• Hierro unido a proteínas o enmascarado: No podemos detectarlo directamente, sino que es necesario someterlo a un proceso de desenmascaramiento para transformarlo en hierro iónico.

Las 3 técnicas fundamentales

• Método de Azul de Perls: Para hierro férrico.
• Método de Azul de Turnbull: Para hierro ferroso.
• Método de Tirmann-Schmeltzer: Para ambos.

Método de Azul de Perls

Es el método de elección porque determina los iones férricos, que son los más abundantes, y desenmascara las proteínas. Se basa en la propiedad que tiene el ferrocianuro potásico para transformarse en presencia de hierro férrico en ferrocianuro férrico (o azul de Prusia) por acción del ácido clorhídrico, que actúa como desencadenante de la reacción:

Ferrocianuro potásico + cloruro férrico (+ HCl) = Ferrocianuro férrico + cloruro potásico

Procedimiento de muestras obtenidas por exfoliación forzada

Existen dos tipos de muestra:

• La impronta: Se realiza en intraoperatorias o durante una biopsia o punción. Para realizarla, se presiona el portaobjetos sobre la parte de la muestra a estudiar, quedando la huella de la zona sobre el cristal.
• Triple toma: Se realizan tres tomas de exudado en el mismo portaobjetos, dispuestas de la siguiente forma: el exudado vaginal en el lugar más próximo a la etiqueta, en el centro del porta se coloca la muestra de exocérvix y en el extremo más alejado la de endocérvix.

Fijación y Tinción

Fijación: Generalmente vienen fijadas con citospray, aplicándolo directamente sobre la extensión. Si no se va a teñir inmediatamente, se debe extraer el citospray mediante pases sucesivos por etanol de 96º.

Tinción: Consiste en aplicar diversas combinaciones de sustancias colorantes a las extensiones. El método más utilizado es el de Papanicolaou.

Influencia sobre el tejido de la tinción HTX-Eo

• El tejido pasa por todas las cubetas de tinción: Normal; el tejido se colorea de forma estándar con la HTX-Eo.
• El tejido pasa por todas las cubetas excepto la del alcohol-ácido: Sin diferenciación; al no eliminar el exceso de HTX, el tejido se observa con un tono azulado excesivo.
• El tejido pasa directamente del alcohol-ácido a eosina: Sin azuleamiento; el tejido adquiere un tono más rojizo al no completar el proceso de viraje.

Proceso de azuleamiento y diferenciación de la laca de HTX de Harris

Azuleamiento: Es el empleo de diferentes soluciones alcalinas, como el agua o el carbonato de litio (utilizado en la HTX-Eo para el azuleamiento de los núcleos). Se lava con agua para quitar la solución; tras la diferenciación, se añade la solución y, hasta que no se produce el cambio de color, no se vuelve a lavar con agua.

Diferenciación: Se emplea porque, al ser la HTX una solución básica, debemos quitar el exceso de esta con una solución ácida. Por ello, utilizamos el alcohol-ácido para eliminar el exceso de colorante con carga negativa.