Técnicas de tinción histológica: H&E, PAS, carmín de Best y tricrómico de Masson

Técnicas de Tinción Histológica

Hematoxilina y Eosina (H&E)

1. Colocar la preparación en la estufa a 60ºC durante 30 minutos.
2. Desparafinar con 3 cubetas de xilol, dejando la preparación 10 minutos en cada una.
3. Hidratar la muestra con alcoholes decrecientes: 15 pases por cada cubeta en alcoholes de 100º, 96º y 96º.
4. Lavar con agua destilada.
5. Teñir con hematoxilina durante 7 minutos.
6. Diferenciar con agua hasta que quede transparente y con alcohol ácido para definir los núcleos.
7. Lavar con agua destilada.
8. Introducir el corte en agua amoniacal durante 10 segundos.
9. Lavar con agua destilada.
10. Teñir con eosina durante 1 minuto.
11. Deshidratación tisular con alcoholes crecientes de 96º, 96º, 100º, 100º (15 pases en cada cubeta).
12. Realizar 15 pases en dos cubetas de xilol.
13. Preservar la muestra con medio de montaje y cubreobjetos.

Ácido Periódico de Schiff (PAS)

1. Desparafinar e hidratar.
2. Incubar con ácido peryódico al 1% durante 5 minutos.
3. Lavar en varias cubetas con agua destilada.
4. Incubar con reactivo de Schiff durante 15 minutos.
5. Lavar con agua corriente templada durante 10 minutos.
6. Lavar con agua corriente 3 minutos.
7. Teñir con hematoxilina de Harris durante 3 minutos.
8. Lavar en agua corriente.
9. Diferenciar en alcohol clorhídrico.
10. Lavar en agua corriente 10 minutos.
11. Deshidratar y montar.

PAS Control

1. Desparafinar e hidratar.
2. Amilasa al 1% durante 30 minutos.
3. Lavar con agua destilada.
4. Pasar a la técnica PAS.

Carmín de Best

1. Desparafinar.
2. Colodionar 1 minuto.
3. Hidratar.
4. Colorear con hematoxilina de Weigert durante 15 minutos.
5. Lavar bastante tiempo en agua corriente.
6. Colorear con solución de trabajo de Best 20-30 minutos.
7. Diferenciar con el líquido de diferenciación hasta que no salga colorante.
8. Deshidratar directamente en alcohol absoluto, pero prolongando los tiempos (2 baños de 10 minutos cada uno). Se trata de que no quede rastro de alcohol metílico.
9. Aclarar y montar.

Resultados:

• Los núcleos azules
• Vacuolas de glucógeno, Moco, fibrina y granulocitos rojo brillante.

Control:

1. Desparafinar
2. No colodionar
3. Hidratar
4. Cubrir los cortes con la enzima salivar (con saliva) a 37°C durante 30 minutos.
5. Se lava cuidadosamente con agua destilada y hacer la tinción del Carmín de Best.

Tricrómico de Masson

1. Desparafinar.
2. Hidratar.
3. Agua destilada durante 6-5 minutos. (Si el tejido no se ha fijado con BOUIN es recomendable sumergir las secciones en solución de Bouin, el cual actúa como mordiente, durante 24 horas a temperatura ambiente o 1 hora en estufa a 56-60 °C)
4. Lavar en 3 cubetas de agua destilada durante 3 minutos en cada una.
5. Hematoxilina férrica de Weigert durante 5 minutos.
6. Diferenciar con agua corriente durante 5 minutos. (Cuando se aprecie el viraje de color se puede comprobar si la tinción es adecuada al microscopio, pudiendo volver a meter las muestras en la hematoxilina si no es suficientemente intensa)
7. Lavar con agua destilada durante 3 minutos.
8. Fucsina escarlata durante 5 minutos.
9. Lavar con agua destilada durante 2 minutos. (Si la tinción es muy clara se devuelven las muestras a la fucsina-escarlata, si es excesiva con dejar las muestras en agua más tiempo es suficiente, ya que se va perdiendo colorante con el tiempo).
10. 15 minutos en Ácido fosfomolíbdico al 5% en agua destilada (Este paso también decolora las secciones por lo que hay que tenerlo en cuenta en los pasos previos. Si no se ve una buena tinción se puede volver a pasos anteriores).
11. Verde luz al 2% (puede ser sustituido por azul de anilina) durante 10 minutos.
12. Unos segundos en agua destilada.
13. Diferenciación con ácido acético al 1% en agua destilada durante 3 minutos.
14. Deshidratado rápido, unos segundos, en etanol de graduación creciente: 80º, 96º y 100º.
15. 2x10 minutos en xileno y Montar