Técnicas de Separación de Mezclas: Procesos de Filtración, Centrifugación y Electroforesis

La Filtración

La filtración es un método que implica la separación de partículas sólidas en una disolución.

Finalidad de la filtración

• 1º Eliminar impurezas sólidas que no nos interesen.
• 2º Separar el filtrado y recogerlo con algún interés analítico.

Tipos de filtración

• 1º Gravedad: usa la fuerza gravitatoria para hacer pasar el líquido a través de un embudo con filtro y obtener la separación.
• 2º Vacío o presión reducida: más rápida que la anterior. Hace pasar el líquido a través de un embudo con filtro.
• 3º Material poroso: mismo procedimiento que en las anteriores, pero la diferencia es que se hace pasar las partículas finas por un material que las retiene. También sirve para filtrar soluciones coloidales.
• 4º Pequeña escala con pipeta Pasteur o filtros adaptados: mismo procedimiento que la filtración por gravedad. Como embudo usamos la pipeta Pasteur con un algodón o una bola de lana de vidrio.

La Centrifugación

La centrifugación es un método que se basa en hacer girar un tubo que contiene una disolución a gran velocidad de modo que las partículas se sedimenten. Se observan dos fracciones:

• El sobrenadante: fracción que no ha sedimentado.
• Sedimento: adherido al fondo del tubo.

Componentes de la centrífuga

• Rotor**
• Tubos de centrífuga
• Motor
• Refrigerador
• Estabilizador
• Frenos
• Ventilador
• Mecanismo de bloqueo de rotación
• Cámara de vacío

**Tipos de rotores

• 1) Rotor basculante: los tubos se colocan de forma perpendicular al eje de giro.
• 2) Rotor de ángulo fijo: los tubos se insertan en orificios en el interior del rotor.

Técnicas de centrifugación

1º Centrifugación preparativa

Su objetivo es aislar partículas y luego trabajar con ellas.

• C. diferencial: cuando queremos separar diferentes partículas en suspensión que difieren en su medio.
• C. densidad zonal: (centrifugación de sucrosa) se preparan tubos de centrífuga con disolución de sucrosa.
• C. en gradiente de densidad: en centrífugas de aceleración. Separamos partículas por su densidad. Es más específica que la c. diferencial.
• C. de densidad isopícnica: construyen gradientes de concentración de materiales.

2º Centrifugación analítica

Determinamos las propiedades de las partículas mediante métodos que nos permiten observarlas mientras gira (no es muy usada en laboratorios).

Electroforesis

Las técnicas electroforésicas se basan en la migración de las moléculas cargadas a través de un campo eléctrico. No todas adquieren la misma velocidad de movimiento.

• - Se desplazan al ánodo positivo
• + Se desplazan al cátodo negativo

Factores que influyen

• El tiempo: a mayor tiempo, aumenta el desplazamiento de las moléculas.
• El medio: (viscoso).
• pH del medio: si varía, cambiaría el estado de las moléculas.

Tipos de electroforesis

• 1) Poliacrilamida: los geles de poliacrilamida se aplican a proteínas. Crean un efecto de tamizado molecular; es decir, debido al tamaño de los poros, permite la movilidad respecto al tamaño de las moléculas que sufren la electroforesis.
• 2) En gradiente: el uso de geles de gradiente significa que el gel no es homogéneo respecto al tamaño del poro.
• 3) Isoelectroenfoque: basada en la electroforesis convencional de poliacrilamida.
• 4) Capilar: desplazamiento de la molécula producido por un campo eléctrico o gel.
• 5) En dos dimensiones: la separación de la segunda dimensión se realiza de manera perpendicular a la primera, de manera que el resultado obtenido sea un mapa de puntos.