Técnicas Moleculares y Métodos Estadísticos en Genética Forense

Metodología para la Determinación de la Huella Genética

Se emplean diversas técnicas moleculares para establecer perfiles genéticos con fines de identificación. A continuación, se detallan las principales metodologías:

1. Polimorfismos de Longitud de Fragmentos de Restricción (RFLP)

Esta técnica se fundamenta en el método de Southern Blot y se desarrolla a través de las siguientes fases:

Protocolo RFLP:

1. Digestión con enzima de restricción: Se generan fragmentos de ADN, algunos de los cuales contendrán un UNTR (minisatélite polimórfico hipervariable).
2. Separación de fragmentos: Los fragmentos de restricción se separan mediante electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida.
3. Transferencia: Se transfieren los fragmentos a una membrana de nitrocelulosa.
4. Hibridación: Se utiliza hibridación con sondas radiactivas específicas a los UNTR que se analizan.
5. Autorradiografía de la membrana:
   • Si se emplean sondas de locus único (SLP), se obtendrán 1 o 2 bandas, dependiendo de si el individuo es homocigótico o heterocigótico.
   • Si se utilizan sondas de locus múltiple (MLP), se obtendrá un patrón de bandas característico de cada individuo.

2. Análisis de STR (Repeticiones en Tándem Cortas) mediante PCR

Esta técnica permite trabajar con cantidades mínimas de ADN. Una vez amplificado un STR, los productos de amplificación se someten a electroforesis en gel de poliacrilamida para separar los alelos presentes en cada muestra y obtener el genotipo.

• En una de las calles del gel se corre una mezcla de todos los alelos portables de ese STR, conocida como escalera alélica.
• En los individuos homocigóticos para un STR se observa una única banda, y en los heterocigóticos, dos.
• Para un mismo individuo se pueden obtener tantas huellas genéticas como juegos de marcadores genéticos se utilicen. Para estandarizar, se han validado varios conjuntos de marcadores genéticos por consenso. El más utilizado es el denominado CODIS, empleado por el FBI.

3. Análisis de SNP (Polimorfismos de Nucleótido Simple o Único)

Ventajas:

• Poseen una tasa de mutación muy baja.
• Al afectar a nucleótidos únicos, la probabilidad de que se conserven en muestras de ADN degradado es mejor que en el caso de los STR.

Inconvenientes:

• El poder de discriminación es muy bajo; se requeriría analizar miles de SNP para alcanzar el poder de discriminación de un análisis de STR.

Análisis del ADN Mitocondrial (ADNmt)

El ADN mitocondrial se utiliza principalmente en estudios forenses que involucran muestras muy antiguas, muy degradadas o con ausencia de ADN nuclear debido a las siguientes razones:

• El ADNmt es más estable que el ADN nuclear.
• El número de mitocondrias por célula es muy elevado y, dentro de cada mitocondria, existen varias copias del ADN, lo que resulta en un número molecular de ADN por célula mayor que el del ADN nuclear.

El ADN mit tiene herencia exclusivamente materna. Los estudios forenses de ADNmt se basan en polimorfismos de secuencia, analizando dos zonas hipervariables que se amplifican y secuencian para establecer comparaciones.

Análisis Estadísticos de los Datos Genéticos

1. Análisis de los STR Autosómicos

Se calcula la probabilidad del perfil detectado en cada uno de los STR analizados.

2. Análisis del Cromosoma Y

No se puede calcular de la misma manera que los STR autosómicos, ya que todos los casos de STR en el cromosoma Y se heredan en bloque.

3. Análisis en Estudios de Paternidad

Existen tres escenarios posibles al comparar el perfil del hijo/a con el del supuesto progenitor:

• Exclusión: Si al menos en 2 marcadores no existe coincidencia entre los alelos del progenitor y los del posible hijo/a, se descarta la paternidad.
• No Concluyente Inicial: Si existe coincidencia de un alelo entre el hijo/a y el supuesto padre/madre para todos los STR estudiados, excepto uno, no existe criterio de exclusión y se amplía el estudio mediante STR autosómicas adicionales.
• Inclusión: Si existe concordancia de todos los STR estudiados, se valida el resultado calculando el Índice de Paternidad (IP).

Genética Forense: Definición y Aplicaciones

La Genética Forense es la rama de la genética y de la medicina legal y forense que analiza la variabilidad genética humana con el objetivo de resolver problemas de identificación.

Aplicaciones Principales:

• Estudios de paternidad.
• Identificación de restos cadavéricos.
• Investigaciones criminales a partir de todo tipo de muestras biológicas humanas.