Técnicas Histológicas: Fijación, Artefactos, Equipamiento y Microscopía

Biología7 nov 2026201,32 KB

Resumen

El documento resume las bases del procesamiento histológico en el laboratorio de anatomía patológica. Incluye los principales fijadores químicos y sus características, la identificación y causas de artefactos tisulares, y los diferentes tipos de microscopios con sus aplicaciones. Además, detalla el flujo de trabajo del equipamiento histotécnico, sistemas de gestión digital e información, y la clasificación de residuos sanitarios.

Puntos clave

Fijadores clave: el formaldehído se emplea en fijación rutinaria, el glutaraldehído en ultraestructura celular y el tetróxido de osmio en lípidos y membranas.
El ácido acético preserva ácidos nucleicos y nucleoproteínas pero destruye mitocondrias.
Los artefactos histológicos son alteraciones no deseadas; por ejemplo, las mellas proceden de una cuchilla defectuosa y la retracción de exceso de alcohol o parafina sobrecalentada.
Flujo técnico: Muestra → procesador → inclusión en parafina → bloque → micrótomo → baño de flotación → portaobjetos → estufa (a 37 °C y 60 °C).
Microscopía electrónica: el MET o TEM analiza la ultraestructura interna, mientras que el MEB o SEM estudia el relieve y la superficie.
Clasificación de residuos: del Grupo I (general) al Grupo VII (radiactivos), incluyendo biosanitarios, citotóxicos y restos humanos.

Ponte a prueba

Asociaciones rápidas de fijadores

Formaldehído: fijación rutinaria.
Glutaraldehído: ultraestructura celular.
Osmio: lípidos y membranas.
Ácido acético: ácidos nucleicos.
Etanol: deshidratación y fijación.

Artefactos histológicos

Artefacto: alteración no deseada producida durante la obtención, el procesamiento o el montaje de una muestra histológica.

Artefacto	Causa
Aplastamiento, fisuras y fragmentación	Técnica quirúrgica defectuosa o traumática
Daño celular	Secado durante el tallado
Cuerpos extraños	Pelos, fibras, polvo o aglomeraciones de colorante
Separación de tejidos	Deshidratación deficiente
Degeneración	Fijación tardía o volumen de fijador insuficiente
Retracción	Demasiado tiempo en alcohol o parafina sobrecalentada
Pliegues	Procesamiento o extensión inadecuada de los cortes
Mellas	Cuchilla defectuosa
Burbujas	Corte grueso, medio de montaje denso o cubreobjetos mal colocado
Gotas de agua	Deshidratación incompleta después de teñir

Fijadores químicos simples

Fijador	Concentración	Característica clave
Etanol	70–90 %	Deshidrata; conserva enzimas, antígenos, glucógeno y pigmentos. Puede provocar retracción tisular.
Ácido acético	1–5 %	Conserva ácidos nucleicos y nucleoproteínas. Destruye mitocondrias.
Ácido pícrico	2 %	Coagula proteínas. Conserva glucógeno y lípidos. Debe eliminarse antes de incluir en parafina.
Formaldehído	4 %	Muy utilizado; compatible con numerosas técnicas histológicas.
Glutaraldehído	0,5–3 %	Excelente para microscopía electrónica. Penetración lenta; no recomendado para inclusión en parafina.
Tetróxido de osmio	—	Conserva lípidos y membranas; utilizado especialmente en microscopía electrónica.

Tipos de microscopios y aplicaciones

Microscopio	Aspecto clave a recordar
Óptico convencional	Utiliza luz visible y un sistema de lentes.
Lupa estereoscópica	Observación macroscópica tridimensional, aproximadamente 2–30×.
Campo oscuro	Fondo oscuro; destaca estructuras intensamente iluminadas.
Contraste de fases	Permite observar muestras transparentes y vivas sin teñir.
Nomarski (DIC)	Aumenta el contraste y proporciona una apariencia de relieve tridimensional.
Invertido	Objetivos situados por debajo de la platina portamuestras.
Fluorescencia	Detecta estructuras marcadas con fluorocromos mediante emisión lumínica.
Confocal	Obtiene secciones ópticas finas y reduce significativamente la luz fuera de foco.
MET / TEM	Microscopio Electrónico de Transmisión: estudia la ultraestructura interna celular.
MEB / SEM	Microscopio Electrónico de Barrido: estudia la superficie y el relieve celular.

Reglas mnemotécnicas esenciales

MET = interior / MEB = superficie.
Inmersión = sumergir muestra / Perfusión = vía vascular.
Formaldehído = rutina / Glutaraldehído = microscopía electrónica.
Ácidos fuertes = rapidez y agresividad / EDTA = lentitud y mejor preservación celular.
Retracción = exceso de alcohol o calor / Degeneración = mala fijación / Mellas = cuchilla defectuosa.

Equipos de histotecnología: función principal

Equipo	¿Para qué sirve?
Estación de tallado	Examen macroscópico y tallado controlado de tejidos.
Procesador	Sustituye el agua del tejido para permitir su impregnación con parafina.
Estación de inclusión	Mantiene y dispensa parafina líquida para formar los bloques.
Micrótomo	Obtiene cortes micrométricos homogéneos.
Baño de flotación	Estira los cortes de parafina y permite seleccionar los adecuados.
Estufa	Seca y favorece la adhesión de los cortes al portaobjetos.
Citocentrífuga (Cytospin)	Concentra células procedentes de líquidos biológicos sobre un portaobjetos.
Teñidor	Realiza tinciones manuales o automatizadas.
Montador automático	Coloca medios de montaje y cubreobjetos sobre preparaciones teñidas.

Secuencia del procesamiento histológico

Muestra → Procesador → Inclusión en parafina → Bloque → Micrótomo → Baño de flotación → Portaobjetos → Estufa.

Temperaturas habituales de la estufa según los apuntes: 37 °C y 60 °C.

Control de calidad y nuevas tecnologías

Sigla	Significado / Función
LIS	Sistema de Información del Laboratorio: identificación y trazabilidad general.
PIS	Pathology Information System: gestión integral de muestras, imágenes e informes.
D-AP	Patología digital: digitalización de muestras histológicas en alta resolución.
E-AP	Patología electrónica: microscopía electrónica y estudio ultraestructural.
TP	Telepatología: colaboración y diagnóstico anatomopatológico a distancia.
F-AP	Farmacopatología: evaluación de reacciones adversas y toxicidad de medicamentos.
Autopsia virtual	Estudio post mortem mínimamente invasivo mediante resonancia magnética y tomografía computarizada.

Normas de calidad citadas en el temario: ISO-13486:2003, ISO 17025:2005 y UNE-ISO-15198:2003.

Clasificación de residuos sanitarios

Grupo I (General): papel, cartón, alimentos y residuos asimilables a urbanos no peligrosos.
Grupo II: biosanitarios asimilables a urbanos.
Grupo III: biosanitarios especiales con potencial riesgo infeccioso.
Grupo IV: cadáveres y restos humanos de entidad suficiente.
Grupo V: residuos químicos peligrosos.
Grupo VI: citotóxicos y agentes carcinógenos/mutágenos.
Grupo VII: residuos radiactivos.

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Preguntas frecuentes

¿Qué fijador es el más adecuado para microscopía electrónica?

El glutaraldehído (al 0,5–3 %) es excelente para ultraestructura en microscopía electrónica, acompañado por el tetróxido de osmio para conservar lípidos y membranas.

¿Cuál es la diferencia de observación entre el MET y el MEB?

El MET (microscopio electrónico de transmisión) examina la ultraestructura interna, mientras que el MEB (microscopio electrónico de barrido) analiza la superficie y el relieve tisular.

¿Qué causa la aparición de retracción en el tejido histológico?

La retracción se produce fundamentalmente por un tiempo excesivo en alcohol durante la deshidratación o por el uso de parafina sobrecalentada.

¿Cuál es la función del baño de flotación en histología?

Su función principal es estirar los cortes micrométricos obtenidos en el micrótomo y permitir la selección de las secciones adecuadas para montarlas en el portaobjetos.