Técnicas Espectrofotométricas y Cromatográficas: Fundamentos y Aplicaciones

Curva Espectral: Fundamentos y Aplicaciones

Una curva patrón se obtiene midiendo la absorbancia de un compuesto a diferentes concentraciones. Para ello, se preparan una serie de disoluciones estándar de la sustancia problema y un blanco. Se mide la absorbancia de cada disolución, trabajando siempre a la misma longitud de onda, que generalmente corresponde con el máximo de absorción del compuesto.

Determinación Espectrofotométrica de Hierro

Los complejos coloreados formados por iones metálicos con reactivos orgánicos dan lugar a una gran variedad de métodos espectrofotométricos, especialmente útiles en el campo de los análisis clínicos y de alimentos. La mayoría de estos complejos son de tipo quelatos, donde el metal participa en un anillo heterocíclico al ligarse con dos o más grupos funcionales en la molécula orgánica.

La reacción entre el hierro(II) y la fenantrolina para formar un complejo coloreado sirve como método sensible para la determinación espectrofotométrica de hierro en soluciones acuosas. La intensidad del color del complejo así formado es independiente del pH en el rango de 2 a 9, y es muy estable, ya que la intensidad del color no sufre cambios en largos periodos de tiempo. La ley de Lambert-Beer es obedecida en una amplia gama de concentraciones.

Cromatografía Líquida de Alta Eficacia (HPLC)

La HPLC es particularmente útil para la separación de materiales con altos pesos moleculares que presentan una volatilidad muy baja y no pueden separarse mediante cromatografía de gases. Se usa principalmente en la biotecnología, en ciencias de la vida y en la industria farmacéutica.

La HPLC utiliza una fase móvil líquida para separar los componentes de la muestra. Los componentes se disuelven en un disolvente y, a continuación, se hacen pasar por la columna a alta presión. Posteriormente, interactúan con la fase estacionaria y eluyen en momentos distintos, de manera similar a la cromatografía de gases. Si una cantidad excesiva de gas disuelto permanece en la fase móvil líquida a la presión de la columna, el gas puede salir del detector y provocar picos no deseados de gran magnitud. Estos pueden eliminarse mediante el burbujeo de helio de alta pureza a través del líquido cuando el sistema HPLC no disponga de un desgasificador integrado. El helio debe presentar bajos niveles de hidrocarburos, ya que estos pueden disolverse en el disolvente y generar ruido en la línea base.

Cromatografía de Gases (GC): Principios y Tipos

La cromatografía de gases (GC) es una técnica cromatográfica en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de la columna cromatográfica. La elución se produce por el flujo de una fase móvil de gas inerte. A diferencia de otros tipos de cromatografía, la fase móvil no interactúa con las moléculas del analito; su única función es la de transportar el analito a través de la columna.

Existen dos tipos principales de cromatografía de gases (GC): la cromatografía gas-sólido (GSC) y la cromatografía gas-líquido (GLC). Esta última es la más ampliamente utilizada y a menudo se denomina simplemente cromatografía de gases (GC).

Su principal aplicación es la separación de especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase estacionaria moléculas de líquido inmovilizadas sobre la superficie de un sólido inerte.