Técnicas de Coloración Fundamentales en Histología y Microscopía
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Técnicas de Coloración Fundamentales en Histología
Tinción de Gram
La tinción de Gram se emplea para diferenciar taxonómicamente las bacterias Gram positivas y Gram negativas. Las bacterias Gram positivas poseen una gruesa pared de peptidoglicano (proteínas y polisacáridos) y se tiñen de azul/violeta. Las bacterias Gram negativas tienen una fina pared de peptidoglicano recubierta de una membrana externa de lipopolisacáridos y se tiñen de rojo/rosa.
Coloración para Vainas de Mielina
La coloración para vainas de mielina utiliza el Luxol Fast Blue.
Impregnación Metálica para Tejido Nervioso
Las técnicas de impregnación metálica son fundamentales para visualizar estructuras del tejido nervioso. Algunas técnicas incluyen:
- Impregnación argéntica: Se utiliza para teñir neurofibrillas.
- Método de Bielschowsky: Tiñe células nerviosas y sus prolongaciones.
- Técnica de Golgi rápido: Tiñe neuronas, astroglía y microglía de negro, mientras que las restantes estructuras no se tiñen.
Impregnación Áurica de Ramón y Cajal
La impregnación áurica de Ramón y Cajal se emplea específicamente para teñir astrocitos (tanto fibrosos como protoplásmicos), coloreándolos de pardo-negruzco.
Tinción de Micobacterias
Las micobacterias son bacterias del género Mycobacterium. Son bacilos considerados Gram positivos (aunque no se tiñen bien con Gram debido a su pared) y son acidorresistentes. Poseen una pared celular única que contiene ácido micólico, un tipo de ácido graso que les confiere una consistencia cérea. Esta composición impide la penetración de la tinción de Gram, requiriendo técnicas especiales como la de Ziehl-Neelsen.
Colorantes Específicos y sus Usos
Uso de la Orceína
¿Se emplearía la orceína para detectar hepatocitos contaminados con el virus de la hepatitis B?
Sí. La orceína es un colorante natural obtenido de ciertos líquenes que tiñe el antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B (HBsAg), así como la proteína asociada al cobre y las fibras elásticas. Los hepatocitos infectados por el virus tienen la propiedad de captar la orceína, coloreándose de color marrón.
Tinción de Fibras Colágenas
Un método común de tinción para fibras colágenas es la Picro-Fucsina de Van Gieson. Esta técnica tiñe los núcleos de azul-negruzco, los citoplasmas de amarillo y las fibras colágenas de rojo intenso.
Mecanismo del Carmín de Best
El mecanismo exacto de tinción del Carmín de Best es actualmente desconocido.
Uso del Carmín de Best
El Carmín de Best tiñe los núcleos de negruzco y el glucógeno de color rojo.
Tinción Carmín de Mayer
La tinción Carmín de Mayer se utiliza para detectar mucinas epiteliales. Su mecanismo de tinción es electrostático: las mucinas contienen mucopolisacáridos ácidos que interaccionan con el carmín, el cual posee carga positiva.
Tinción de Lípidos con Sudán IV
El Sudán IV es un colorante que tiñe las grasas y lípidos de rojo intenso a naranja/rojizo.
Principios y Técnicas Adicionales
Importancia de la Desparafinación
Es fundamental desparafinar e hidratar una muestra antes de proceder a la tinción, especialmente en muestras incluidas en parafina. No se puede teñir correctamente una muestra sin este paso previo.
Hematoxilina
La hematoxilina es un colorante básico que se asocia y tiñe componentes celulares ácidos, como los núcleos (debido al ADN).
Colorantes Ortocromáticos y Metacromáticos
Un colorante se denomina ortocromático si tiñe las estructuras de su mismo color. Si, por el contrario, tiñe las estructuras de un color diferente al suyo, se denomina metacromático.
Consideraciones en Microscopía Electrónica
Tetróxido de Osmio como Fijador
¿En qué casos se emplea el tetróxido de osmio como fijador secundario?
Se utiliza principalmente cuando se prepara una muestra para su observación en Microscopía Electrónica (ME).
Tinción vs. Contrastado en Microscopía Electrónica
Para el caso de la Microscopía Electrónica (ME), ¿se tiñe o se realiza un contrastado?
En ME, generalmente se realiza un contrastado en lugar de una tinción. El tetróxido de osmio se utiliza a menudo durante el proceso de refijación para añadir contraste a las estructuras celulares.