Técnicas de Centrifugación: Gradientes de Densidad, Aplicaciones y Protocolo de Uso

Métodos de Centrifugación: Tipos de Gradientes de Densidad

El gradiente puede ser de dos tipos principales:

1. Gradiente Preformado

Se prepara antes de centrifugar y puede ser:

• Discontinuo o escalonado: Se depositan capas sucesivas de disolución con concentraciones decrecientes.
• Continuo: Se preparan dos disoluciones con distintas concentraciones y se colocan en un dispositivo formador de gradientes. Se obtiene un fluido con un gradiente continuo de concentración, que va desde la más alta hasta la más baja que se haya usado.

2. Gradiente Autoformado

Se prepara la disolución y el gradiente se crea mediante la propia centrifugación. Al mismo tiempo que se separan los componentes, se va formando el gradiente, el cual siempre será continuo.

Variantes de la Centrifugación en Gradiente de Densidad

Existen dos variantes principales dentro de este método:

Centrifugación Zonal (o por Zona)

Se utiliza un gradiente preformado, que puede ser continuo o discontinuo. La centrifugación debe detenerse antes de alcanzar el equilibrio, para evitar que las partículas más densas lleguen al fondo y se mezclen las bandas. Las partículas se sedimentan en bandas discretas.

Centrifugación Isopícnica (o de Equilibrio)

Se utiliza un gradiente continuo de densidad, cuya densidad máxima es mayor que la del componente más denso de la muestra. Por lo tanto, las partículas nunca se sedimentan en el fondo, sino que alcanzan una posición estable en el gradiente y se concentran en una banda muy estrecha. El tiempo de centrifugación suele ser de uno o dos días.

Aplicaciones Clave de la Centrifugación

Algunas de las aplicaciones más importantes incluyen:

• Obtención de leucocitos: Se usa una centrifugación por gradiente de densidad zonal. Es un método rápido.
• Fraccionamiento subcelular: A partir de un homogeneizado tisular, se obtienen los diferentes componentes celulares mediante centrifugación diferencial.
• Obtención de suero o plasma: Se aplica a la sangre una Fuerza Centrífuga Relativa (FCR) de 1500g durante 10 minutos. Se pueden usar tubos con gel en el fondo, lo cual facilita la conservación de las biomoléculas del sobrenadante.
• Concentración de células: La centrifugación permite concentrar las células para su posterior estudio.
• Extracción de biomoléculas: Se realiza una separación de fases por centrifugación, seguida de la extracción de las biomoléculas mediante disolventes orgánicos.

Manejo y Uso Correcto de la Centrífuga

Consideraciones de Ubicación y Seguridad

Las centrífugas deben estar ubicadas lejos de fuentes de calor. Si se trata de un modelo de sobremesa, debe colocarse en una superficie perfectamente nivelada.

Procedimiento Operativo

1. Colocación de los tubos: Es fundamental seguir las siguientes precauciones:
   • Evitar vibraciones.
   • Comprobar que los tubos estén bien tapados.
   • Equilibrar la carga (colocando tubos de peso similar en posiciones opuestas).
   • Tapar correctamente la centrífuga tras colocar los tubos.
2. Selección de parámetros: Se selecciona la velocidad y el tiempo de centrifugación.
3. Finalización y recuperación: Cuando finalice el programa, se puede abrir la centrífuga y recuperar los tubos. La mayoría de las centrífugas modernas cuentan con dispositivos de seguridad que bloquean el rotor en caso de apertura accidental o impiden la puesta en marcha si la tapa está abierta.