Purificación de ácidos nucleicos mediante esferas magnéticas

4.5 Purificación mediante esferas magnéticas.

La purificación mediante esferas magnéticas se basa en la unión de los ácidos nucleicos a microesferas magnéticas que pueden ser retenidas mediante un imán.

Las microesferas suelen estar constituidas por nanopartículas de magnetita.

dsorción de ácidos nucleicos a esferas magnéticas.

Las microesferas se recubren de grupos funcionales con alta afinidad por los ácidos nucleicos.

1. Las esferas se añaden al lisado junto con un agente caotrópico. De esta manera, los ácidos nucleicos se unen a la superficie de las esferas.
2. El tubo que contiene la mezcla se coloca en un soporte con un imán. Las esferas son atraídas por el imán y se agrupan en la zona de la pared del tubo.
3. El resto del lisado, proteínas y componentes celulares contaminantes se eliminan mediante pipeteo.

4. Lavado con etanol: para lavar los ácidos nucleicos, se retira el tubo del imán, se añade etanol al 70% y se agita. Se vuelve a poner el tubo en el imán (de modo que se vuelven a juntar las esferas) y se eliminan los restos de contaminantes.

5. Para resuspender los ácidos nucleicos, se retira el tubo del imán y se incuba con agua destilada milli-Q o tampón TE. Los ácidos nucleicos se separan de las esferas y se resuspenden en el medio.

6. Finalmente, se coloca el tubo en el separador magnético para que las esferas (no unidas a los ácidos nucleicos) se junten a la pared. Los ácidos nucleicos se pipetean y se transfieren a un tubo limpio.