Protocolos de Laboratorio para el Diagnóstico Metabólico y Lipídico

Diagnóstico de la Diabetes Mellitus

El diagnóstico de la diabetes se puede realizar mediante diferentes síntomas o signos. Por ejemplo, si el valor de la glucemia es superior a 200 mg/dl y está asociada a la sintomatología característica de **poliuria**, **polifagia**, **polidipsia** y la **pérdida de peso inexplicable**, puede ser suficiente para el diagnóstico.

La excepción son las mujeres embarazadas, en cuyo caso se realiza una prueba de cribado específica denominada **test de O’Sullivan**.

Determinación de Marcadores de Diabetes

1. Hormonas

   Se determinan principalmente la **insulina** y el **péptido C** por métodos inmunoenzimáticos a partir de muestras de suero o plasma.

2. Pruebas Inmunológicas

   Se utilizan para determinar la presencia de **anticuerpos específicos** contra la insulina o contra las células beta (β) del páncreas. Consisten en métodos de enzimoinmunoanálisis (como la prueba **ELISA**) y de inmunofluorescencia (**FIA**).

Regulación del Metabolismo de los Lípidos

La regulación del metabolismo de los lípidos se realiza de forma hormonal por la **insulina**, las **hormonas tiroideas** y otras que regulan la lipogénesis y la lipólisis según las necesidades corporales.

Lipogénesis

La **lipogénesis** es la formación de triglicéridos a partir de los ácidos grasos procedentes de la dieta y el glicerol. La estimula la insulina y se produce principalmente en el **tejido adiposo**.

Lipólisis

La **lipólisis** consiste en la movilización de triglicéridos almacenados en el tejido adiposo, cuando son requeridos como combustible. En este proceso interviene la enzima **lipasa**.

Métodos de Cuantificación de Lípidos y Lipoproteínas

Determinación de Triglicéridos

Los triglicéridos se determinan con **métodos enzimáticos**. En esta técnica se intenta transformar los triglicéridos iniciales en una sustancia coloreada por medio de una serie de enzimas y de la **reacción de Trinder**, en la cual se obtiene un compuesto coloreado a partir de H₂O₂ por medio de la peroxidasa. El compuesto coloreado se puede cuantificar a una longitud de onda de 546 nm, siendo el incremento de la absorción por unidad de tiempo proporcional a la concentración de triglicéridos.

Determinación de Colesterol Total

Se realiza a partir de muestras de suero y plasma, y en su cuantificación se utilizan **métodos enzimáticos acoplados**. Como aproximadamente dos tercios (2/3) del colesterol circulante se encuentra esterificado, la primera reacción que se realiza es hidrolizar los ésteres del colesterol. Después, por una reacción en cadena, se obtiene H₂O₂, el cual puede ser cuantificado mediante la **reacción de Trinder**. Se trata de una técnica a punto final y la absorbancia se mide a una longitud de onda de 546 nm.

Determinación de HDL (Colesterol de Lipoproteínas de Alta Densidad)

Actualmente, la mayoría de los métodos que se utilizan en el laboratorio para obtener la HDL son de **forma directa**, es decir, sin separación previa de las otras lipoproteínas que se encuentran en la muestra. Para su medición se utilizan **métodos enzimáticos acoplados**.

Valores Normales de HDL

Los valores normales de HDL se sitúan entre **40-60 mg/dl**. Si el nivel es inferior a 40 mg/dl, se eleva el riesgo de **enfermedad cardiovascular**, aunque el colesterol total no sea muy elevado.

Determinación de LDL (Colesterol de Lipoproteínas de Baja Densidad)

1. De Forma Directa

   Se procede de la siguiente manera:

   • Las muestras se someten a la acción de un primer detergente que solubiliza el colesterol no LDL.
   • El colesterol solubilizado se consume por acción de dos enzimas: la colesterol-esterasa y la colesterol-oxidasa.
   • El colesterol LDL restante se solubiliza con un segundo detergente y se cuantifica enzimáticamente.

2. Determinación Estimada

   Partiendo de las medidas de colesterol total, HDL y triglicéridos, se estima el valor de la LDL por medio de la **ecuación matemática de Friedewald**.

Técnicas Bioquímicas Complementarias

Electroforesis

La **electroforesis** separa y cuantifica las fracciones más importantes de las proteínas plasmáticas, obteniendo un **patrón electroforético**. El soporte sólido tradicional para la electroforesis ha sido el acetato de celulosa, aunque en la actualidad se está sustituyendo por **gel de agarosa**. Cuando se utiliza este último, se puede emplear la **electroforesis capilar**, que está completamente automatizada.

Espectrofotometría y Densitometría

1. Espectrofotometría

   Se recortan las distintas franjas y se introducen en un tubo con un disolvente que retira las proteínas del gel, obteniendo así una solución para cada franja, la cual se utiliza para medir la **absorbancia**.

2. Densitometría

   En esta técnica, un fotómetro cuantifica el colorante fijado en cada una de las franjas y lo representa en un **proteinograma** que nos da la fracción de cada componente.