Protocolos de Identificación Bioquímica: Lípidos y Proteínas en Laboratorio

Protocolos de Identificación de Biomoléculas

Las muestras utilizadas incluyen: aceite de girasol, solución de sacarosa 0,1 M y el extracto procesado.

1. Test de solubilidad en solventes polares y no polares

Los lípidos son compuestos insolubles en solventes polares y solubles en solventes no polares. Para este ensayo, el solvente polar utilizado es agua y el solvente no polar es aceite mineral.

• Preparación: Preparar dos grupos de 3 tubos cada uno y rotularlos con un marcador indeleble.
• Adición de solventes: Agregar 1 ml (20 gotas) de agua al primer grupo y 1 ml de aceite mineral al segundo grupo.
• Muestras: Agregar 1 ml de cada muestra a ensayar a un tubo de cada grupo.
• Procedimiento: Mezclar bien, esperar 2 minutos y examinar detenidamente.

2. Test de Rojo Sudán

El Sudán III es un compuesto coloreado soluble en aceites y grasas. Cuando se añade a una mezcla de lípidos y agua, el colorante se ubica en la capa lipídica, tiñéndola de rojo.

1. Agregar una gota de colorante rojo Sudán a cada tubo del ensayo anterior (agua + muestra).
2. Mezclar los contenidos agitando fuertemente.
3. Esperar 2 minutos y examinar detenidamente.

3. Determinación cualitativa de proteínas: Reacción de Biuret

El reactivo de Biuret es de color azul claro y se torna violeta en presencia de proteínas.

1. Preparar un grupo de 4 tubos y rotular.
2. Agregar 1 ml de muestra y 1 ml de medio alcalino (NaOH 5N) a cada tubo.
3. Añadir 5 gotas del reactivo de Biuret (CuSO₄ 1% P/V).
4. Mezclar por inversión e incubar 20 minutos a temperatura ambiente (TA).
5. Observar los resultados.

4. Desnaturalización de proteínas por pH

1. Preparar un grupo de 4 tubos y rotular.
2. Colocar 1 ml de agua y 1 ml de muestra en cada tubo.
3. Agregar 0,5 ml (10 gotas) de Ácido Tricloroacético (TCA) al 10%.
4. Mezclar y observar la reacción.

5. Desnaturalización de proteínas por temperatura

1. Preparar un grupo de 4 tubos y rotular.
2. Colocar 1 ml de agua y 1 ml de muestra en cada tubo.
3. Mezclar los contenidos.
4. Incubar durante 5 minutos en baño de agua a 60 °C.
5. Observar los cambios.