Protocolos Fundamentales para la Inclusión y Procesamiento de Tejidos en Histología

Consideraciones Iniciales para la Recepción de Muestras

La correcta **inclusión** de las muestras es crucial para obtener secciones histológicas adecuadas para el estudio microscópico. Las características de la muestra dictan el procedimiento inicial de descripción:

• Muestras pequeñas: Se debe registrar su tamaño, color y consistencia.
• Órganos parenquimatosos: Se describen la forma, tamaño, color, peso, consistencia y superficie.
• Órganos huecos: Se detallan la forma, tamaño, color, peso, la morfología de la luz, la estructura de la pared y la apariencia de la mucosa.

Proceso de Inclusión de Muestras

1. Deshidratación

El objetivo de la deshidratación es sustituir el agua del tejido por un medio compatible con el agente infiltrante (parafina).

El protocolo general implica:

1. Introducir la muestra en agua (para rehidratar si es necesario o lavar).
2. Introducir progresivamente en baños de etanol: etanol al 70%, etanol al 90%, etanol al 95% y, finalmente, etanol absoluto (100%).
3. Realizar varios baños en cada concentración de etanol.
4. La duración de cada paso varía significativamente según el tipo y tamaño del tejido.
5. Advertencia: Si el tiempo de exposición al etanol es excesivo, el tejido puede endurecerse, dificultando el corte posterior.

2. Aclaramiento

Una vez que el agua ha sido completamente sustituida por etanol, este debe ser reemplazado por un agente que sirva de intermedio entre el etanol y la parafina (agente aclarador, comúnmente xileno).

La elección del agente aclarador se basa en varios criterios:

• Rapidez con la que elimina el agente hidratante (etanol).
• Preservación de la estructura tisular.
• Su toxicidad y volatilidad.

El tiempo de exposición a los agentes aclaradores dependerá de:

• El tipo y tamaño del tejido.
• La volatilidad del líquido utilizado.

3. Formación de Bloques (Infiltración y Embebido)

Este paso consiste en infiltrar el tejido con parafina fundida e incluirlo en un molde para obtener un bloque sólido y manejable.

Pasos para la formación del bloque:

1. Depositar una primera capa de parafina fundida en los moldes metálicos y dejar que enfríe ligeramente. Desechar la capa superficial si se ha solidificado demasiado rápido.
2. Colocar la muestra orientada sobre esta capa de parafina.
3. Poner el casete encima para su correcta identificación y terminar de cubrir la muestra con parafina.
4. Colocar el molde en una placa fría para solidificar el bloque completamente y proceder al desmolde.

Orientación Específica de Tejidos durante la Inclusión

Orientación de Estructuras Tubulares

Para estructuras como vasos deferentes, venas y arterias:

• Deben ser incluidas en una orientación tal que la cuchilla corte a través de la luz tubular.
• La orientación debe ser tan vertical como sea posible respecto al plano de corte para obtener secciones transversales claras de la luz.

Orientación de Superficies Epiteliales

Aplicable a tejidos con una superficie epitelial prominente, como la piel o el intestino:

• Deben ser colocados de forma que el plano de sección pase a través de todas las capas del tejido (sección perpendicular a la superficie).
• Colocarse en la parte más alta del bloque (cerca de la superficie de corte).
• Cortar la capa de queratina (en el caso de la piel) al final ayuda a reducir la compresión y los rasguños en las capas subyacentes.
• Cuando se procesan múltiples muestras con epitelios, deben ser encastradas una junto a la otra, manteniendo la misma dirección de orientación.

Inclusión de Especímenes Grandes y Sólidos

Para especímenes grandes y sólidos, como el útero, la próstata, la glándula tiroides y el tejido óseo:

• Deben ser incluidos con un ligero ángulo en relación al borde de la cuchilla.
• Esto permite que el corte comience con menos resistencia, minimizando la posibilidad de desplazar el tejido fuera del bloque.
• Esta técnica también reduce notablemente la vibración y la inestabilidad del borde de la cuchilla o del bloque.

Inclusión de Múltiples Especímenes

Para fragmentos múltiples de tejido blando o ganglios linfáticos:

• Deben ser colocados uno junto al otro, manteniendo suficiente espacio entre ellos para evitar la fusión de los cortes.
• La organización metódica de los tejidos facilita el estudio de la lámina y confiere un aspecto más profesional que si los fragmentos se incluyen al azar.
• Los tejidos rectangulares pequeños deben ser orientados con su eje longitudinal casi paralelo al borde de la cuchilla para minimizar los pliegues y la distorsión causados por la presión del corte.

Mantenimiento de las Estaciones de Inclusión

El mantenimiento adecuado de la estación de inclusión es vital para la calidad del proceso:

• Limpiar cuidadosamente cualquier derrame de parafina para evitar impurezas y contaminación de los siguientes bloques.
• Hay que impedir que los revestimientos de la superficie del aparato entren en contacto con el xilol (agente aclarador).
• Se puede emplear una espátula blanda de plástico para eliminar restos de parafina sin rayar las superficies.
• Para limpiar el depósito de parafina, se utiliza celulosa.
• Es fundamental realizar una limpieza regular.

Conceptos Avanzados: Estereología

La estereología es una disciplina fundamental en la histología cuantitativa.

Mediante esta técnica se puede obtener información cuantitativa sobre un material tridimensional (como un órgano o un tumor) a partir de mediciones realizadas exclusivamente en sus secciones bidimensionales.

Se define como la ciencia de estimar información dimensional mayor de muestras de menores dimensiones. Es una herramienta esencial en la histología, la neuroanatomía y la anatomía de los huesos para obtener parámetros morfológicos objetivos.