Protocolo de Laboratorio para Urocultivo: Identificación y Antibiograma

La orina debe ser procesada en el laboratorio dentro de las 2 horas siguientes a la recolección para lograr recuentos de colonias exactos. Luego, se deberán identificar las colonias y realizar el antibiograma correspondiente.

Materiales para el Urocultivo

• Muestra de orina patológica
• Sedimento de orina
• Agar Mac Conkey, Medio hipertónico de Chapman (Agar Manitol), Agar Sabouraud, en placas
• Agar nutritivo en tubos con 20 ml licuado +/- 50°C
• Agar Mac Conkey en tubos con 20 ml licuado +/- 50°C
• Tubos con medio TSI, LIA, Caldo peptonado, MR-VP, Agar Citrato de Simmons, Agar Urea de Christensen
• Tubos con 9.9 ml de Suero fisiológico 0.85%
• Pipetas de 1 ml estériles
• Placas Petri vacías estériles
• Bocal con desinfectante
• Microscopio
• Serie de colorantes de Ziehl-Neelsen
• Serie de colorantes de Gram
• Láminas portaobjetos y laminillas

Procedimiento del Urocultivo

Primer Día: Análisis y Siembra

A. Estudio de las Características Macroscópicas

Describir el aspecto de la orina:

Color (amarillo, oscuro, castaño o incoloro). Señalar si la orina es clara o turbia.

B. Estudio de las Características Microscópicas

1. Obtener una gota del sedimento urinario y observarlo entre lámina y laminilla al microscopio con objetivos de 10X y 40X.
2. Realizar un frotis y colorear por el método de Gram y Ziehl-Neelsen.

C. Siembra de la Muestra de Orina

1. Tomar 0.01 ml de la orina sin centrifugar y sembrar por dispersión y agotamiento en las placas con Agar Mac Conkey, Agar Manitol y Agar Sabouraud.

2. Método de dilución: Preparar una dilución de la orina de la siguiente manera:

   1. Con la pipeta de 1 ml, obtener 0.1 ml de orina sin centrifugar y transferirlo al tubo con suero fisiológico 0.85% estéril. Mezclar bien.
   2. Con la misma pipeta transferir 0.1 ml de la mezcla a cada una de las placas Petri vacías estériles.
   3. A cada una de las placas agregar el Agar Mac Conkey licuado y a la otra el Agar nutritivo licuado. Rotar sobre la mesa del laboratorio para obtener una mezcla homogénea.
   4. Una vez solidificado el Agar, incubar a 37°C por 18-24 horas.

Lectura de Resultados (Primer Día)

1. En el sedimento de la orina, los elementos que pueden observarse son: pus, eritrocitos, cristales anormales, leucocitos, levaduras, parásitos, espermatozoides, células epiteliales, cilindros.
2. En los frotices coloreados por Gram, observar la presencia de bacterias Gram positivas y Gram negativas, y por el método de Ziehl-Neelsen las bacterias ácido alcohol resistentes (en caso de infección por Mycobacterium).

Segundo Día: Análisis de Colonias y Pruebas Bioquímicas

1. En la siembra de la orina sin centrifugar, observar en la placa de Agar Mac Conkey el crecimiento de colonias lactosa positivas; en las placas de Agar Manitol, el desarrollo de colonias resistentes a altas concentraciones de sales, y en el Agar Sabouraud, si hay presencia de levaduras.
2. En la siembra por dilución, observar el desarrollo bacteriano en las placas, contar el número de colonias en un 1/8 de la placa y multiplicarlo por 8 y luego por 1000.
3. Se deberá seleccionar una colonia lactosa positiva y negativa del Agar Mac Conkey, preparar suspensiones en caldo nutritivo y realizar las pruebas diferenciales en la serie bioquímica respectivamente: TSI, Caldo peptonado, MR-VP, Citrato de Simmons, LIA y Urea de Christensen. Incubar a 37°C por 18-24 horas.

Nota: El agente causal aislado e identificado deberá ser sometido a Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana. El antibiograma se realiza tomando 5 colonias del Agar Mac Conkey, se prepara una suspensión en un tubo con SF al 0.85%, y se determina la Concentración Mínima Inhibitoria (MIC) del antibiótico cuya finalidad es orientar en la terapéutica y la concentración del antibiótico alcanzado en el suero o en foco de infección.

El método de disco-difusión estandarizado [Kirby-Bauer] es el que se usa de rutina en el laboratorio, para dicha determinación (MIC).

Reporte Final del Urocultivo

Diseñar el protocolo correspondiente, señalando:

1. La observación macroscópica y microscópica de la muestra clínica.
2. Las características del desarrollo bacteriano, y los principios bioquímicos en cada uno de los medios selectivos empleados.
3. Los resultados del comportamiento bioquímico.
4. La determinación del agente patógeno causante de la infección urinaria.
5. Determinación cuantitativa del número de UFC por ml.

Nota: UFC (Unidad Formadora de Colonia)