Procesamiento de Tejidos para Histopatología: Pasos Esenciales

Toma de Muestra

La toma de muestra es el primer paso crucial, donde se obtiene el tejido en el menor tiempo posible y sin causar traumatismos, preservando su integridad.

Fijación

En esta etapa, la muestra se somete a la acción de fijadores para preservar su estructura celular y tisular. Los más comunes incluyen:

• Formalina
• Zenker
• Bouin

Tras la fijación, el tejido experimenta un cambio de color, indicando la acción de los agentes químicos.

Deshidratación y Sustitución

Este proceso se divide en varias fases:

1. Eliminación del fijador: Inicialmente, se elimina el exceso de fijador mediante lavados con agua.
2. Deshidratación progresiva: El tejido se deshidrata gradualmente con baños de alcohol o acetona. Se sumerge en concentraciones crecientes de alcohol:
   • Alcohol 50%
   • Alcohol 70%
   • Alcohol 96%
   • Alcohol 100% (absoluto)
   Este proceso dura aproximadamente 30 minutos.
3. Aclaramiento: Tras la deshidratación con alcohol, la muestra se sumerge en metil benzoato I, donde inicialmente flota y luego se hunde. Para finalizar, se sumerge en metil benzoato II. El agente de sustitución utilizado es el xilol, en el cual la muestra reposa durante 4 horas.

Inclusión

La inclusión consiste en integrar la muestra en una matriz sólida para obtener un bloque que permita realizar cortes finos. Esta etapa tiene una duración de 8 horas y se realiza de la siguiente manera:

1. La muestra se impregna en parafina fluida con puntos de fusión crecientes (Parafina I).
2. Posteriormente, se transfiere a parafina limpia (Parafina II) para la formación del bloque de inclusión, también conocido como Placas de Luxes.
3. El bloque se moldea utilizando un molde desmontable donde se vierte la parafina líquida junto con la muestra.
4. Finalmente, se deja enfriar a temperatura ambiente, solidificándose en un bloque de parafina que contiene el tejido, denominado Taco.

Corte

En la etapa de corte, el bloque de parafina se extrae del molde y se fija a un soporte de madera para su manipulación y montaje en el equipo. Posteriormente, se obtienen láminas muy finas del bloque utilizando un micrótomo, una máquina especializada que produce cortes de grosor micrométrico.

Cada lámina se transfiere a un portaobjetos que contiene agua y albúmina, la cual actúa como agente adherente. Finalmente, el portaobjetos se calienta suavemente para estirar y alisar el corte, preparándolo para la siguiente fase.

Tinción

Los cortes, al estar infiltrados en parafina y carecer de color, no son adecuados para su observación microscópica. Por ello, la tinción es un proceso esencial que incluye:

1. Desparafinación: Se elimina la parafina mediante baños de xilol (un solvente orgánico).
2. Rehidratación: La muestra se rehidrata pasándola por concentraciones decrecientes de alcohol hasta llegar a una solución 100% agua, con la cual se lava. Las concentraciones de alcohol son:
   • Alcohol 100%
   • Alcohol 96%
   • Alcohol 70%
   • Alcohol 50%
3. Tinción con hematoxilina: Una vez rehidratada, la muestra se tiñe con hematoxilina en un baño de 5 minutos, se lava con agua.
4. Tinción con eosina: Se sumerge nuevamente la muestra, esta vez en un baño de eosina, seguido de otro lavado.
5. Deshidratación final: Después de la tinción, es crucial deshidratar la muestra de nuevo para permitir la fijación permanente del cubreobjetos. Esto se logra con rápidos baños de xilol.

Al concluir este proceso, la muestra adquiere una coloración morada característica, lista para su observación.

Montaje

En la fase de montaje, sobre la muestra teñida y deshidratada, se coloca un cubreobjetos para protegerla. Este se sella de forma permanente con una gota de Bálsamo de Canadá, asegurando la durabilidad de la preparación.

Resultado Final: Laminilla Histológica

Una laminilla histológica es una preparación de tejido permanente montada sobre una superficie plana y delgada, lista para su examen microscópico. Se compone de tres elementos principales:

• Portaobjetos: La base de vidrio.
• Corte o Tejido: La muestra biológica procesada.
• Cubreobjetos: La delgada lámina de vidrio que protege el tejido.