Procedimientos para el Recuento Celular Manual y Determinación de Hemoglobina

Procedimientos para el Recuento Celular Manual en Hemogramas

Los frecuentes recuentos celulares manuales para la determinación del hemograma se basan en los siguientes pasos:

1. Diluir la sangre total anticoagulada con EDTA con el diluyente adecuado en una proporción determinada.
2. Cargar la dilución en una cámara de recuento o hemocitómetro. El hemocitómetro más utilizado es la cámara de Neubauer.
3. Contar bajo el microscopio, con el objetivo de 40x, las células presentes en un volumen concreto de dilución.
4. Efectuar los cálculos necesarios para obtener el número de células por microlitro (µl) de sangre.

La Cámara de Neubauer

La cámara de Neubauer es un portaobjetos especial de vidrio, de un grosor muy superior al de un portaobjetos convencional. Tiene una franja central delimitada por dos surcos laterales y dividida en dos por un surco horizontal central. Cada una de las dos partes en que queda dividida esta franja es una cámara de recuento y tiene grabada una cuadrícula consistente en un cuadrado de 3x3 mm (9 mm²) con una serie de subdivisiones internas en cuadrados más pequeños.

Recuento de Leucocitos

Para efectuar el recuento de leucocitos, la sangre total anticoagulada con EDTA se diluye en la proporción 1/20 con un diluyente adecuado. El diluyente debe tener, en este caso, dos componentes: un agente lisante, como el ácido acético, y un colorante que tiñe los núcleos de los leucocitos, como el violeta de genciana o el azul de metileno. El más utilizado es el líquido de Türk.

Una vez cargada la cámara con la dilución sanguínea, el recuento de los leucocitos se efectúa en los cuatro cuadrados primarios de 1 mm de lado situados en las esquinas de la cámara, cada uno de los cuales está subdividido a su vez en 16 cuadrados secundarios.

Para realizar los cálculos finales, hay que tener en cuenta que cada cuadrado primario tiene un área de 1 mm² (1 mm x 1 mm) y en él se depositan las células contenidas en 0,1 mm³ (1 mm² de área por 0,1 mm de altura). Como en este caso se cuentan cuatro cuadrados primarios, el volumen total contado será de 0,4 mm³.

Recuento de Plaquetas

Para efectuar el recuento de plaquetas, la sangre total anticoagulada con EDTA se diluye en proporción 1/100 con una solución hipotónica, para lisar los hematíes, y que tenga actividad antiagregante, para evitar la agregación plaquetaria. El diluyente más utilizado es una solución de oxalato amónico al 1%, pero se pueden utilizar otros diluyentes que incorporan además colorantes para visualizar mejor las plaquetas, como el líquido de Rees Ecker.

Una vez cargada la cámara, el recuento se efectúa en los mismos cuadros que para el recuento de hematíes. A pesar del pequeño tamaño de las plaquetas, se visualizan bien con la microscopía por su gran birrefringencia.

Determinación de la Hemoglobina

La concentración sanguínea de hemoglobina se puede medir por varios procedimientos colorimétricos. El Comité Internacional para la Estandarización de la Hematología recomienda el método de la cianmetahemoglobina por su exactitud.

Este método se basa en la transformación de la hemoglobina en cianmetahemoglobina mediante dos reacciones químicas: el ion ferroso (Fe) de la hemoglobina, en presencia de ferrocianuro potásico, se oxida a ion férrico (Fe³).