Procedimiento para la Preparación de Bancos de Diluciones Seriadas

Preparación de un banco de diluciones

Para preparar un banco con un factor de dilución 2 a partir de una disolución madre con concentración C₀, seguimos estos pasos:

1. Numeración: Numeramos los tubos de dilución del 1 al 5.
2. Adición del diluyente: Ponemos 1 mL de diluyente en cada uno de ellos. Para facilitar los cálculos, usamos el volumen necesario para que, añadiéndole 1 mL posterior, la dilución sea la deseada. En este caso, para obtener una dilución 1:2 a partir de 1 mL de disolución madre, la cantidad de diluyente necesario es de 1 mL.
3. Transferencia inicial: Traspasamos 1 mL de la disolución madre al tubo n.º 1; este volumen que traspasamos de cada tubo al siguiente se denomina volumen de paso (Vp).
4. Dilución en cadena: Traspasamos 1 mL del tubo 1 al 2 y agitamos. Hacemos lo mismo con los tubos 2-3, 3-4 y 4-5.

Al acabar, los tubos 1 a 4 contendrán 1 mL de dilución, que es el volumen final (Vf), equivalente al volumen de diluyente que hemos puesto al principio en cada tubo.

En distintas situaciones podemos necesitar un volumen final determinado, o un volumen de paso concreto, según los requerimientos del ensayo.

Aplicaciones de los bancos de diluciones: Diluciones seriadas en microbiología

Este procedimiento es fundamental para el estudio de microorganismos. Los pasos a seguir son:

1. Preparación de materiales: Preparamos 5 tubos y 5 placas de Petri con un medio de cultivo adecuado. En ambos casos, los numeramos del 1 al 5.
2. Llenado de tubos: Introducimos 9 mL de caldo de cultivo en cada tubo.
3. Inoculación inicial: Introducimos 1 mL de la muestra en el 1.er tubo y homogeneizamos.
4. Transferencia seriada: Introducimos 1 mL del 1.er tubo en el 2.º y homogeneizamos. Repetimos el proceso con el resto de los tubos.
5. Ajuste de volumen: Retiramos 1 mL del último tubo para que tenga el mismo volumen que los demás. Ese mL se puede desechar, siempre siguiendo las estrictas pautas de seguridad biológica.
6. Siembra: Sembramos 1 mL del tubo 1 en la placa 1; repetimos el proceso con los demás tubos y placas.
7. Incubación: Incubamos las placas el tiempo necesario, según el tipo de microorganismos que buscamos.
8. Recuento de colonias: Efectuamos el recuento de colonias, utilizando la placa cuya densidad de crecimiento la haga más adecuada para ese fin. Para determinar, a partir del recuento, el número de colonias de la muestra, tendremos en cuenta los datos de la tabla de dilución correspondiente.