Preparación de Tejidos para Microscopía: Un Proceso Paso a Paso

Preparación de Tejidos para Microscopía

Fijación del Tejido

El objetivo de la fijación es mantener el tejido lo más parecido a su estado vivo. Como inconveniente, los fijadores pueden alterar la estructura de los tejidos. Es imprescindible que los tejidos estén bien fijados para una buena tinción.

• El volumen del fijador debe ser 20-40 veces mayor al volumen del tejido a fijar.
• La fijación suele realizarse a temperatura ambiente.
• En el caso de los tejidos óseos, es necesario realizar un proceso de descalcificación.

Lavado-Deshidratación

Una vez el tejido está fijado, se realiza un proceso de lavado. La deshidratación se realiza con varios pases en alcohol a concentraciones crecientes. Esto conlleva a un endurecimiento del tejido y eliminación de agua de los mismos.

Aclarado

Se sustituye el alcohol que queda en el tejido con un disolvente. El disolvente ayudará a la parafina a penetrar en el tejido.

• El líquido utilizado en el aclarado no debe dañar el tejido y debe tener la menor toxicidad posible.
• Se realizan baños sucesivos en el disolvente.

Inclusión

El tejido se sumerge en ceras o resinas para dar consistencia al tejido.

• La muestra se introduce en un recipiente con parafina líquida a 60ºC. Así el aclarante se elimina por evaporación y la parafina ocupa su lugar.
• El tejido se introduce en un molde de acero con parafina y se deja endurecer.

Corte

Consiste en realizar cortes de 3-4 micras de grosor con el microtomo.

• Si la visualización se va a realizar en un microscopio electrónico, el grosor de los cortes será de 0,6-0,8 micras, realizadas con el ultramicrotomo.
• Las muestras se llevarán al baño termostático.

Desparafinado

Consiste en eliminar la parafina intra y extracelular. Es imprescindible para que los colorantes penetren en el tejido.

• Se realiza con los disolventes anteriormente mencionados.

Hidratación

Eliminación del disolvente. Para ello, se utilizan pasos decrecientes de alcohol hasta llegar al agua. Es un paso necesario para que los colorantes solubles en agua penetren en el tejido.

Tinción

Consiste en utilizar colorantes para teñir los tejidos y poder así visualizarlos al microscopio. El colorante más utilizado es: Hematoxilina-Eosina.

Deshidratación

Nuevamente, se realiza la deshidratación en soluciones crecientes de alcohol para su posterior aclarado.

Aclarado

Elimina el alcohol con ayuda de los disolventes orgánicos, para permitir el montaje.

Montaje

Se añade al porta una gota de medio de montaje (entellan) que hará de adhesivo para el cubreobjetos.