Métodos de Separación y Técnicas de Visualización en Laboratorio

Técnicas de Separación Mecánicas

Filtración

• Filtros utilizados: papel, membrana, vidrio molido o placas filtrantes.
• Tipos de filtración: por gravedad, al vacío, esterilizante (microfiltración, ultrafiltración, nanofiltración).

Decantación y Centrifugación

La centrifugación separa componentes basándose en el coeficiente de sedimentación.

Tipos de Centrifugación

• Por velocidad: baja, alta, ultracentrífuga.
• Por tipo de rotor: angular, flotante, vertical.
• Por función: microcentrífuga, citocentrífuga, microhematocrito.

Tipos de Centrifugación (Clasificación Avanzada)

• Analítica
• Preparativa:
  • Preparativa simple
  • Preparativa diferencial
  • Preparativa en gradiente de densidad (gradiente preformado: discontinuo o escalonado; continuo: autoformado).
  • Variantes: centrifugación zonal, centrifugación isopícnica.

Aplicaciones de la Centrifugación

• Obtención de leucocitos, suero o plasma.
• Fraccionamiento subcelular.
• Concentración de células.
• Extracción de biomoléculas.

Técnicas Difusionales

Separan componentes debido a una mayor difusión de un componente desde una fase a otra. Ejemplos incluyen la extracción con disolventes y la absorción.

Técnicas de Identificación: Electroforesis

Principios y Equipamiento

La electroforesis utiliza un campo eléctrico para separar moléculas.

Componentes del Equipo

• Fuente de alimentación.
• Cubeta (dos recipientes y un puente).
• Soporte:
  • No restrictivo: acetato.
  • Restrictivo: gel de agarosa y poliacrilamida.

Factores que Afectan la Migración

La velocidad de migración (Vmigración) está influenciada por:

• Forma y tamaño de las moléculas.
• Soporte: absorción, electroendosmosis, tamizado.
• Tampón: electrólisis, fuerza iónica adecuada, carga neta constante.
• Campo eléctrico: diferencia de potencial, intensidad de corriente, resistencia y tiempo.

Tipos y Aplicaciones Específicas de Electroforesis

• Acetato de celulosa: separación de proteínas de suero/plasma.
• Gel de agarosa: separación de ADN (lectura con transiluminador de luz ultravioleta).
• Poliacrilamida: separación de proteínas (incluyendo gel concentrador y gel no desnaturalizante/desnaturalizante).
• Electroenfoque: separación de aminoácidos.
• Electroforesis bidimensional: separación de proteínas y aminoácidos.
• Campos pulsantes: separación de microorganismos.
• Inmunoelectroforesis: separación de gammapatías.
• Electroforesis capilar: separación de proteínas plasmáticas.

Microscopía Óptica

Principios de la Luz y la Visión

Características de la Onda Lumínica

Se consideran la longitud de onda ($\lambda$), la amplitud (a) y la frecuencia (f).

Materiales y Propiedades de la Luz

• Materiales: opacos, transparentes, traslúcidos.
• Propiedades de la luz:
  • Reflexión: no penetra, se dispersa (especular, difusa, mixta).
  • Refracción: cambio de dirección del rayo.
  • Difracción: el haz atraviesa un orificio.

Visión y Lentes

• Fotoreceptores: bastones y conos.
• Lentes:
  • Convergente: los rayos de luz que provienen de distintas direcciones forman una imagen real.
  • Divergente: separa los rayos, formando una imagen virtual.
• Aberraciones: esfericidad (puntos no siempre coinciden en foco), cromáticas (la lente dispersa colores), y plana.

Componentes y Propiedades del Microscopio

Componentes del Microscopio

• Sistema óptico: objetivo, ocular, aumento, tubo.
• Mecánico: pie o base, columna, mecanismo de enfoque, platina, revólver.
• Iluminación: fuente de luz, condensador, diafragma.

Propiedades Fundamentales

• Aumento.
• Poder de resolución.
• Límite de resolución.

Tipos de Objetivos y Nomenclatura

Clasificación de Objetivos

• Según el medio: secos, de inmersión.
• Según las correcciones: acromáticos, semiapocromáticos, apocromáticos.

Nomenclatura

• Objetivos: aumento, apertura numérica, distancia focal, espesor de lámina cubreobjetos, longitud del tubo, propiedades ópticas, medio de inversión, correcciones ópticas.
• Oculares: aumento, número de campo.