Métodos de recuento y medición en cultivos celulares

Recuento en microscopio

Se puede determinar el número de células por unidad de volumen observando al microscopio una muestra representativa del cultivo, en las denominadas cámaras Petroff-Hauser.

Medida del peso seco de células

Una alícuota de cultivo se centrifuga, y el pellet obtenido, una vez lavado se seca en estufa y se pesa.

Medida de la turbidez

La concentración de células es proporcional a la cantidad de luz que es capaz de absorber. Se utiliza el espectrofotómetro, normalmente con medidas entre 600-700 nm. Es un método rápido de manipulación sencilla.

LATENCIA

No hay incremento en el número de células, es un proceso de adaptación del inóculo al medio. Es tanto más largo cuanto más distintas son las nuevas condiciones en las que las células deben crecer, respecto a las que tenían originalmente.

CRECIMIENTO EXPONENCIAL

Rápida multiplicación de células. Crecimiento balanceado (composición de células constante) de forma exponencial, bajo condiciones apropiadas la velocidad será máxima.

ESTACIONARIA

En un cultivo discontinuo existen limitaciones de crecimiento por agotamiento de algún nutriente esencial, acumulación de tóxicos, etc. La velocidad de crecimiento es nula. Las células son activas y pueden producir metabolitos secundarios.

El objetivo principal de un buen proceso biotecnológico para producción de un metabolito primario: es minimizar la duración de la fase lag y maximizar la velocidad y duración de la fase exponencial, ya que en esta fase es donde se produce el compuesto deseado, y ralentizar al máximo la llegada a la fase estacionaria.

Ley de Malthus

Describe el crecimiento “balanceado”, es decir, las actividades de síntesis celular están coordinadas de manera que la composición celular media no se ve afectada por la proliferación de la población. Por ello, es capaz de representar la fase exponencial de crecimiento en fermentaciones en “batch” y fermentaciones en continuo, ya que al mantenerse el valor de las variables en estado estacionario, se obtiene un valor constante de la velocidad de crecimiento (μ), que se aproxima al crecimiento balanceado.

Modelos de crecimiento

Solo es necesario conocer la evolución experimental de la biomasa con el tiempo.