Métodos de Laboratorio para la Tipificación Sanguínea ABO, Rh y Pruebas de Coombs

Tipificación Sanguínea ABO-Rh Directa: Método en Placa (Prueba Globular)

PRUEBA GLOBULAR: Método en placa o tipificación ABO-Rh directa.

I. Procedimiento

1. Colocar 1 gota de anti-A en un portaobjetos de vidrio, limpio y rotulado.
2. Colocar 1 gota de anti-B en otro portaobjetos de vidrio limpio y rotulado.
3. Colocar 1 gota de anti-D en un tercer portaobjetos limpio y rotulado (opcional).
4. Dispensar una gota de la muestra de sangre anticoagulada con EDTA sobre la gota de los antisueros.
5. Mezclar cada preparación con un palillo en un área de 20 x 40 mm aproximadamente.
6. Rotar manualmente cada lámina por 2 minutos, evitando apoyar en superficies calientes.
7. Leer, interpretar y registrar los resultados de las reacciones en todos los portaobjetos.

Lectura e Interpretación

Positivo: La aglutinación fuerte de los glóbulos rojos en presencia de cualquier anticuerpo ABO. Las reacciones positivas muestran 3+ de aglutinación.

Negativo: La presencia de una suspensión uniforme (0) de glóbulos rojos.

Nota: Las muestras con reacciones débiles o dudosas deben reevaluarse con un método en tubo.

Tipificación ABO-Rh: Determinación en Tubo

VRA-FR-44 V.2.0

1. A partir de las muestras problema, se procederá a obtener suspensiones de las células al 5%.
2. Rotular 3 tubos con el nombre o número de la muestra. Además, rotular “A” al primero, “B” al segundo y “D” al tercero.
3. Agregar a cada tubo rotulado, una gota del reactivo que corresponda (anti-A, anti-B, anti-D).
4. Agregar una gota de nuestra suspensión de hematíes al 5 % a cada tubo.
5. Centrifugar a 3,500 r.p.m. el tiempo previamente establecido para la lectura directa.
6. Retirar los tubos, interpretar y registrar los resultados de las reacciones en todos los tubos.

Tipificación Sérica (Prueba Inversa)

A diferencia de las pruebas globulares anteriormente descritas que emplean sueros testigo, esta prueba utiliza glóbulos rojos testigo tipo A, B y AB en suspensión al 5% y el suero o plasma de la persona a clasificar. La prueba puede realizarse en tubo, de acuerdo con las técnicas antes descritas.

Procedimiento

• Rotular 2 tubos como “A1” y “B”.
• Colocar en cada tubo 2 gotas del suero o plasma proveniente de la muestra en estudio.
• Agregar a cada tubo correspondiente una gota de glóbulos A1 y glóbulos B.
• Centrifugar los tubos a 3,500 r.p.m. por 15 segundos.
• Suavemente, resuspender el botón de células para observar la presencia o ausencia de aglutinación contra un fondo blanco bien iluminado.
• Leer hemólisis o aglutinación en los tubos, graduando en cruces.

Tipificación de Subgrupos ABO (Uso de Lectinas)

Procedimiento

1. Preparar una suspensión de glóbulos rojos en Solución Salina Fisiológica (SSF) al 5%.
2. Colocar una gota de Anti A Lectina en un tubo de 10 x 75.
3. Con una pipeta Pasteur, agregar una gota de la suspensión de glóbulos rojos.
4. Mezclar bien y centrifugar a 2500 r.p.m. por un minuto.
5. Resuspender los glóbulos rojos cuidadosamente y examinar el tubo en busca de aglutinación.

Prueba de Antiglobulina Directa (PAD) o Test de Coombs Directo

Procedimiento (Semana 6)

1. A partir de la muestra problema, obtener una suspensión al 5%.
2. Colocar una gota de hematíes al 5% en un tubo rotulado.
3. Lavar cuatro veces con solución salina fisiológica (SSF) al 0.85% y decantar la solución salina después del último lavado.
4. Agregar 2 gotas de Antiglobulina Humana (Suero de Coombs) Poliespecífica.
5. Centrifugar a 3 500 r.p.m. el tiempo previamente establecido para la lectura directa.
6. Leer y anotar sus resultados.

Resultados

Aglutinación: Positivo. Ausencia de Aglutinación: Negativo.

Prueba de Antiglobulina Indirecta (PAI) o Test de Coombs Indirecto

Procedimiento (Semana 9)

1. En un tubo, colocar 2 gotas del suero problema y una gota de glóbulos rojos sensibilizados (células de panel o pantalla).
2. Se incuba a 37 °C por 15 minutos (min). Se centrifuga el tubo a baja velocidad (3500 r.p.m. x 1 minuto).

Fase 1: Observación Inicial

Observar aglutinación (reacción IgM). Si hay aglutinación, registrar y reevaluar. Si no hay aglutinación, continuar el proceso.

3. Se lavan los glóbulos rojos sensibilizados tres veces con solución salina, desechando completamente el sobrenadante en el último lavado, dejando solo el botón de eritrocitos en el fondo.
4. Agregar dos gotas de suero de Coombs y mezclar perfectamente.
5. Centrifugar a baja velocidad (2500 r.p.m.) y buscar aglutinación en el fondo del tubo.