Métodos de Laboratorio para la Detección de Autoanticuerpos: IFI, ELISA y Aglutinación
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Métodos de Detección de Autoanticuerpos en Enfermedades Autoinmunes
El diagnóstico de las enfermedades autoinmunes es crucial para establecer la patología, su pronóstico y la evolución clínica. Por este motivo, la determinación analítica de los autoanticuerpos (autoAc) implicados es fundamental.
Técnicas Analíticas Utilizadas
Las principales técnicas utilizadas para la detección de autoAc incluyen:
- Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)
- Técnica de Aglutinación
- ELISA (Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas)
- Inmunotransferencia o Inmunoblot (IB)
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI): Fundamentos y Aplicación
La Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) se realiza mediante la incubación del suero del paciente sobre un sustrato antigénico constituido por finas secciones de tejido. Se utiliza como sustrato antigénico secciones de riñón, hígado, estómago, tiroides, protozoos y monocapas de células cultivadas.
Después de la incubación del suero problema con el sustrato antigénico, los componentes del suero no unidos son eliminados mediante lavado. A continuación, se añaden anticuerpos (Ac) anti-inmunoglobulina humana conjugados a un fluorocromo, que generalmente es el isotiocianato de fluoresceína (FITC). Los Ac anti-Ig humana unidos a los autoanticuerpos (autoAc) de la muestra se visualizan con un microscopio de fluorescencia.
Expresión e Interpretación de los Resultados de IFI
Antes de la realización de la IFI, la muestra de suero se diluye con una solución isotónica de pH neutro (solución salina con tampón fosfato). Con el objeto de realizar una estimación de la concentración de autoAc en la muestra, pueden efectuarse diluciones dobles seriadas a partir de la dilución inicial del suero del paciente.
La expresión de los resultados ofrece dos posibilidades:
Método Cualitativo
Se expresa como positivo (+) si se visualiza fluorescencia o negativo (-) si no se visualiza.
Método Semicuantitativo
Si el suero es positivo (+), se realizan diluciones con una solución isotónica a pH neutro. Los resultados se expresan en forma de título.
Definición de Título
El título es la mayor de las diluciones efectuadas a la muestra que proporciona fluorescencia específica apreciable.
Técnicas de Aglutinación
La aglutinación consiste en la agregación de partículas mediante una reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac), formando una masa claramente visible. Esta técnica analítica ha sido muy utilizada para la detección del Factor Reumatoide (FR) y puede realizarse de forma cualitativa o semicuantitativa.
Detección de Autoanticuerpos mediante ELISA
La técnica ELISA (Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas) ha desplazado a la técnica IFI en muchos laboratorios, ya que ofrece varias ventajas operativas:
- Coste no elevado.
- Rapidez en la ejecución.
- Permite analizar múltiples sueros simultáneamente.
- Interpretación menos subjetiva.
- Alta sensibilidad.
El ELISA indirecto es el formato que ofrece una mayor posibilidad de detección de diferentes autoAc, permitiendo identificar isotipos de inmunoglobulinas (Ig) e incluso subclases.
Aplicaciones Específicas del ELISA
Existen técnicas inmunoenzimáticas estandarizadas y comercialmente disponibles para la determinación de los autoanticuerpos antinucleares (ANA) más comunes en el Lupus Eritematoso Sistémico (LES). Permite la detección de los ANA más comúnmente estudiados. También se pueden encontrar anticuerpos anticolágeno, esenciales para el diagnóstico de la artritis reumatoide.
Otros kits comerciales muy utilizados aplican una modificación de la técnica de Western Blot, destacando por su uso sencillo.