Metodologia i Conceptes Essencials de la Cromatografia

Metodologia General de la Cromatografia

Aquests són els passos essencials per al desenvolupament d'un mètode cromatogràfic:

1. Elecció de la columna i de la fase estacionària.
2. Elecció de la fase mòbil i del flux.
3. Ajust de la temperatura.
4. Tractament i injecció de la mostra: Les mostres es tracten adequadament assegurant-se que cap producte no volàtil entra a la columna.
5. Desenvolupament del mètode. Càlculs i resultats.
6. Seguretat: Per l’ús de gasos comprimits cal extremar les mesures de seguretat.
7. Neteja i manteniment de l’equip.

Cromatografia Líquida d'Alta Resolució (HPLC)

Característiques Clau de l'HPLC

• És la millor tècnica dins la cromatografia líquida.
• La separació es pot obtenir per partició, adsorció o intercanvi iònic.
• Consistia a fer passar per gravetat una fase líquida sobre una fase estacionària sòlida retinguda en una columna.
• Requereix molt material, procediments de pretractament i precisió.

Components Essencials del Sistema HPLC

Fase Mòbil

• Tractament dels dissolvents: Per eliminar gasos i partícules.
• Dipòsits de la fase mòbil.
• Sistemes de bombeig i sistema de barreja: Control del flux.

Sistemes d’Injecció de la Mostra

Muntatges més o menys sofisticats dissenyats per introduir un petit volum de mostra líquida entre el sistema de bombeig i la columna.

Columnes

De diferents diàmetres i longituds.

Detectors

S’utilitzen diversos detectors:

• Índex de refracció
• Detector UV-Vis
• Detector de fluorescència
• Detector de conductivitat elèctrica
• Detector electroquímic

Metodologia Específica per a HPLC

1. Tractament de la mostra: Mostres líquides o sòlides prèviament diluïdes. La mostra ha de filtrar-se abans d’introduir-la al sistema, amb filtres adequats.
2. Elecció de la fase mòbil.
3. Tractament de la fase mòbil.
4. Purga del sistema.
5. Elecció i col·locació de la columna.
6. Desenvolupament del mètode: Càlculs i resultats.
7. Neteja i manteniment de l’equip.

Terminologia Clau de la Cromatografia

Suport

Sòlid inert al procés al qual està fixada la fase estacionària (placa de vidre, columnes, etc.).

Fase estacionària

Sòlid o líquid químicament inert però actiu cromatogràficament. Està fixa i no té mobilitat.

Fase mòbil

Gas (gas portador) o un líquid (eluent), generalment inert químicament i actiu cromatogràficament. Està en moviment.

Dissolvent

Líquid o gas que conté la substància que es vol separar.

Cromatograma

Resultat de la cromatografia.

Interacció entre Fases

Sempre hi ha fase estacionària i fase mòbil. Entre elles no reaccionen, sinó que són complementàries i competitives entre elles per retenir (Fase estacionària) o alliberar (Fase mòbil) un component.

Tècniques Cromatogràfiques Segons el Fenomen Físic

Adsorció

El solut s’adsorbeix en la superfície de les partícules que componen la fase estacionària.

Partició o repartiment

El solut s’equilibra entre la fase estacionària i la fase mòbil per diferència de solubilitat.

Intercanvi iònic

La fase estacionària és una resina polimeritzada unida covalentment a grups funcionals iònics.

Exclusió molecular

No hi ha interacció entre la fase estacionària i el solut.