Método Kjeldhal: Determinación de Nitrógeno y Proteínas

Método Kjeldhal para la Determinación de Nitrógeno y Proteínas

Introducción

El método Kjeldhal es una técnica ampliamente utilizada para determinar la cantidad de nitrógeno presente en una muestra. A través de factores de conversión, este método permite estimar el contenido de proteínas en la muestra.

Procedimiento

1. Digestión

Fundamento

Durante la digestión, el nitrógeno presente en la muestra se convierte en sulfato de amonio.

Reactivos

• Ácido sulfúrico concentrado (H₂SO₄) al 96%
• Catalizador Kjeldhal (sulfato de potasio, sulfato de cobre y selenio)

*NOTA: El catalizador acelera la reacción, aumentando el punto de ebullición.

Material

• Balanza analítica
• Mortero
• Papel de filtro
• Vidrio de reloj y espátula
• Matraz Kjeldhal
• Manta calefactora
• Soporte, vástago y pinzas
• Probeta de 25 cc
• Campana extractora

Procedimiento

1. Con el equipo montado, introducir en el matraz Kjeldhal 1 gramo de muestra previamente triturada (si es necesario) y envuelta en papel de filtro.
2. Añadir 10 gramos de catalizador Kjeldhal y 25 cc de H₂SO₄ al 96%, previamente medido con una probeta de 25 cc.
3. Introducir el montaje en la campana extractora, conectar la manta calefactora y comenzar la digestión.
4. La digestión finaliza cuando, después de 20-30 minutos, la muestra se vuelve transparente (verdosa azulada).

2. Destilación (No incluido en el documento original)

*NOTA: Esta sección no estaba incluida en el documento original, pero es un paso crucial en el método Kjeldhal.

Después de la digestión, el sulfato de amonio se convierte en amoníaco mediante la adición de una base fuerte (como NaOH). El amoníaco liberado se destila y se recoge en una solución ácida de concentración conocida.

3. Valoración

Fundamento

Determinar la cantidad de amoníaco producido en la destilación. Esta determinación es indirecta, se calcula restando la cantidad de ácido sulfúrico que no reaccionó con el amoníaco de la cantidad inicial.

Se determina la cantidad de ácido sulfúrico que reaccionó con el amoníaco, teniendo en cuenta el exceso inicial de 25 cc y la cantidad de ácido sulfúrico que no reaccionó con el amoníaco (0.1N o 0.5N) mediante valoración con hidróxido de sodio (NaOH) 0.1N o 0.5N y un indicador.

Reactivos

• NaOH 0.1N o 0.5N (dependiendo de la cantidad de proteína; si supera los 8 gramos, se utiliza 0.5N)
• Indicador (como rojo de metilo)

Material

• Bureta
• Embudo
• Soporte, vástago y pinzas
• Erlenmeyer

Procedimiento

1. **Preparación de la bureta:**
   • Montar la bureta y asegurarse de que funcione correctamente.
   • Realizar lavados con el reactivo que se va a utilizar para impregnar la bureta.
   • Cargar la bureta y asegurarse de que quede una medida exacta para determinar posteriormente la cantidad gastada.
2. Colocar el Erlenmeyer, añadir el indicador y comenzar a añadir gota a gota el NaOH hasta la neutralización. La neutralización se produce cuando el color cambia de violeta a verde esmeralda.
3. Registrar la cantidad de NaOH gastada y proceder a realizar los cálculos pertinentes.

Blanco

Se realiza un método Kjeldhal sin muestra (blanco) con el fin de detectar posibles trazas de nitrógeno en el papel de filtro que podrían falsear el resultado.

*DIFERENCIA: Se utiliza siempre NaOH 0.1N ya que, como mucho, hay trazas de nitrógeno. El exceso de H₂SO₄ también será de 0.1N.