Mètodes de Determinació de Vitamina C i Àcid Ascòrbic

La determinació de vitamina C engloba la determinació d’àcid ascòrbic i deshidroascòrbic, ja que ambdós formen l’activitat vitamínica. A diferència, però, la determinació d’àcid ascòrbic només fa referència a aquest compost.

Mètodes Selectius per a l'Àcid Ascòrbic

• Volumetria: La molècula d'àcid ascòrbic s’oxida a deshidroascòrbic, gràcies al reactiu 2,6-dicloroindofenol, que passa de la seva forma oxidada a reduïda. Aquesta forma reduïda és la que podem detectar en el mètode. Com més àcid ascòrbic tinguem a la mostra, més reactiu reduït es formarà.

  A la bureta posem el reactiu oxidant i, a l’erlenmeyer tenim l’extracte de l’àcid ascòrbic. Conforme van caient gotes del reactiu sobre l'àcid ascòrbic, la solució passa de ser rosa a incolor.

  (*) El reactiu de la bureta el tenim en una concentració coneguda.

  És un mètode molt simple i pràctic, però només permet determinar àcid ascòrbic, NO podrem determinar l’activitat vitamínica C. La limitació d’aquest mètode és que hi pot haver altres substàncies que poden reduir el 2,6-dicloroindofenol (substàncies amb activitat antioxidant i caràcter reductor) i, hi pot haver error en pensar que tot aquest reactiu reduït és gràcies a l’oxidació de l’àcid ascòrbic quan en realitat no ho és (podem pensar que hi ha molt àcid ascòrbic, però són les substàncies reductores les causants de la reducció del reactiu).

• Mètodes Enzimàtics: Només reaccionarà amb l’àcid ascòrbic, per tant és més específic. No interfereixen altres substàncies antioxidants. El mètode enzimàtic està basat en la utilització de l'ascorbat-oxidasa, que oxida molt selectivament l'àcid ascòrbic a deshidroascòrbic.

  Presenta l'avantatge de ser més exacte i precís, doncs no interfereixen altres reductors. Però, presenta l'inconvenient de no determinar la forma deshidroascòrbica de la vitamina C.

Mètodes per a la Determinació de Vitamina C

• Colorimetria per determinar conjuntament les dues formes:
  1. Oxidació de l’àcid ascòrbic a deshidroascòrbic gràcies al 2,6-dicloroindofenol.
  2. Formació del grup cromòfor afegint a l'àcid deshidroascòrbic, 2,4-dinitrofenilhidrazina i H₂SO₄. Es forma la hidrazona.
  3. Determinació per espectrofotometria a una absorbància de 520 nm.
• CLAE: Si volem una determinació molt exacta de les dues formes, fem una cromatografia (CLAE). CLAE és el mètode d'elecció per a determinar separadament les concentracions d'àcid ascòrbic i àcid deshidroascòrbic. La fase estacionària més utilitzada és la fase inversa d'amino-sílica, amb eluent acetonitril/fosfat monopotàssic i detecció espectrofotomètrica a 268 nm.