Mètodes cromatogràfics i les seves aplicacions

Els mètodes cromatogràfics es mantenen de dues maneres diferents:

Segons la forma que les fases es posen en contacte:

• Columna: Un tub estret conté la fase estacionària a través de la qual es fa passar la fase mòbil per pressió.
• Plana: La fase estacionària es fixa sobre una placa plana o a un paper i la fase mòbil es mou a través per capil·laritat o gravetat.

Segons el tipus de les fases mòbil i estacionària:

• Fase mòbil gas
• Fase mòbil líquida

Cromatografia de Repartiment

Es basa en la distribució d’un solut entre dues fases líquides immiscibles, la fase mòbil i la fase estacionària que forma una fina pel·lícula a la superfície d’un suport granulat i inert. El solut s’equilibra entre les dues fases d’acord amb el seu coeficient de distribució relacionat amb la solubilitat del solut i la seva polaritat. La polaritat és deguda a la distribució de càrregues dins de la molècula i cada substància té una polaritat determinada.

Cromatografia d’Adsorció

Consisteix en l’adhesió dels àtoms o molècules d’una substància damunt la superfície d’una altra (absorbent). La fase estacionària és un sòlid amb centres actius on es produeix un enllaç feble amb les substàncies a separar. És un fenomen de superfície que bàsicament depèn de la solubilitat de l’analit, la mida de partícula, la càrrega elèctrica i la volatilitat.

Cromatografia Iònica

Està basada en la separació i determinació d’ions amb ús de resines d’intercanvi iònic. Les partícules carregades negativament s’uneixen a la matriu sòlida carregada positivament, i són retingudes. Les partícules carregades positivament són rebutjades per la matriu sòlida carregada positivament i són eluïdes.

Cromatografia d’Exclusió de Mida

La fase estacionària són partícules polimèriques que tenen una xarxa de porus uniforme per on passa la mostra i el solvent. El temps de residència dins dels porus depèn de la mida de les partícules de l’analit.

Cromatografia d’Exclusió Molecular

És una tècnica que s’aplica per a la separació i caracterització de substàncies de pes molecular elevat. S’utilitza en Bioquímica per a separar molècules grans com proteïnes i hidrats de carboni. La fase estacionària està constituïda per una matriu porosa, la qual té una mida determinada i està completament plena amb el dissolvent emprat com a fase mòbil.

Cromatografia d’Afinitat

És una tècnica que s’utilitza amb finalitat preparativa. Una espècie que interacciona amb un únic solut d’una barreja complexa s’uneix covalentment a la matriu de la fase estacionària d’una columna. L’unió entre el lligant i la matriu normalment es fa a través dels grups –OH d’aquesta i ha de poder realitzar-se en condicions suaus.

La fase estacionària està unida a un grup biològicament actiu. La interacció entre l’analit i la fase estacionària és a través d’una reacció bioquímica, reversible i altament selectiva.

Aplicacions: purificació de substàncies complexes com àcids nucleics, proteïnes, polisacàrids...