Medios de Cultivo para Microorganismos: Tipos, Componentes y Preparación

Medios de Cultivo para Microorganismos

¿Qué son los Medios de Cultivo?

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos.

Características de las Bacterias

Las bacterias son organismos quimioorganoheterótrofos, es decir:

• Obtienen la energía necesaria a partir de diferentes reacciones químicas.
• Utilizan compuestos orgánicos como donantes de los electrones que necesitan.
• Utilizan compuestos orgánicos como fuente de carbono.

Componentes Comunes de los Medios de Cultivo

• Agar: Agente gelificante inerte que se usa para dar consistencia al medio.
• Gelatina: Proteína obtenida mediante extracción de colágeno a partir de tejidos animales. Es un agente solidificante, aunque bastantes bacterias provocan su licuación.
• Carbohidratos: Son la principal fuente de energía.
• Peptona: Es un producto de composición variable obtenido generalmente por hidrólisis de proteína. Contiene aminoácidos y cadenas cortas de péptidos. Es la principal fuente de nitrógeno de los medios de cultivo.
• Extracto de carne: Contiene bases orgánicas solubles.
• Extracto de levadura: Se consigue a partir de levadura de pan o cerveza.
• Sangre: La más utilizada es la sangre de cordero. Tiene que estar estéril y estar libre de agentes antimicrobianos.
• Plasma
• Suero: Aporta factores de crecimiento.
• Bilis
• Sales biliares
• Indicadores

Clasificación de los Medios de Cultivo

Según su Estado Físico

• Medios sólidos: Son medios que contienen un agente solidificante en proporción de 12-15 g/l.
• Medios semisólidos: Son medios que contienen un agente solidificante en proporción de 2-4 g/l.
• Medios líquidos: Son medios que no contienen ningún agente solidificante.

Según su Composición

• Medios químicamente definidos: Se conoce con exactitud su composición y la concentración de cada uno de los nutrientes.
• Medios complejos o indefinidos: No se conoce con exactitud la composición ni la concentración de los nutrientes.

Según su Uso

• Medios comunes: Contienen los nutrientes para el crecimiento de las bacterias que no presentan requerimientos especiales.
• Medios enriquecidos: Son medios comunes suplementados con sustancias nutritivas y para el crecimiento de bacterias exigentes.
• Medios selectivos: Incluyen sustancias que inhiben el crecimiento de un tipo de microorganismo, favoreciendo el de otros.
• Medios diferenciales: Incluyen sustancias que permiten diferenciar bacterias. Se usan en procesos de identificación bacteriana.
• Medios de enriquecimiento: Es un medio siempre líquido que favorece el crecimiento de una especie determinada.
• Medios de transporte y mantenimiento: Se emplean en la recogida, transporte y conservación de muestras biológicas. Son medios que inhiben las reacciones enzimáticas autodestructivas.

Preparación de Medios de Cultivo

1. Disolución de ingredientes: Sea a partir de los ingredientes o por disolución de un medio en polvo, para preparar el medio es necesario controlar las concentraciones de cada ingrediente. Es importante ajustar el pH, ya que favorecerá o inhibirá el crecimiento.
2. Esterilización: Para conseguir una correcta esterilización mediante técnicas de calor, la temperatura y el tiempo seleccionados deben alcanzar todo el líquido. El calor incide primero sobre el líquido que está en la cara externa y luego va penetrando hasta llegar a la zona más interna. Esto implica que: el tamaño de los recipientes será un factor importante para determinar el tiempo y la temperatura, y no se recomienda esterilizar juntos recipientes grandes y pequeños.
3. Distribución del medio: El medio preparado y esterilizado se distribuye en placas o tubos.

Procedimiento Adicional

Nota: Este procedimiento parece describir una técnica de tinción, no la preparación de medios de cultivo.

1. Cubrir el porta con fucsina fenicada y calentar el porta por debajo, lento y progresivamente, con un mechero hasta que el colorante emita vapores sin llegar a hervir.
2. Dejar que se enfríe y repetir el calentamiento 2-3 veces.
3. Lavar con agua destilada, arrastrando el papel.
4. Decolorar con alcohol clorhídrico durante 2 min a temperatura ambiente.
5. Lavar con agua destilada y escurrir.
6. Cubrir el porta con una solución de azul de metileno e incubar.
7. Lavar con agua destilada.
8. Visualizar al microscopio.