Medios de Cultivo Microbiológico: Preparación, Esterilización y Observación

¿Qué es un Medio de Cultivo?

Un medio de cultivo es un conjunto de sustancias que proporcionan los nutrientes necesarios para el desarrollo de microorganismos in vitro. Un buen medio de cultivo debe cumplir con las siguientes características:

• Contener los elementos nutritivos esenciales en concentración adecuada.
• Tener la cantidad necesaria de sales y el volumen apropiado de agua.
• Estar exento de sustancias inhibidoras.
• Poseer la consistencia deseada.
• Tener el pH conveniente.
• Ser estéril.

Para preparar un medio de cultivo, se disuelven los ingredientes en agua destilada en un recipiente, siguiendo el orden indicado para evitar la formación de precipitados difíciles de solubilizar.

Clasificación de los Medios de Cultivo

Según su origen:

• Medios naturales: agua, leche, papa, suero, sangre, etc.
• Medios artificiales: preparados a partir de sus componentes, pueden ser químicamente definidos o complejos.

Según su composición y uso:

• Medios comunes: caldo y agar nutritivo, adecuados para el cultivo de la mayoría de los microorganismos.
• Medios enriquecidos: contienen suplementos nutritivos (sangre, vitaminas, yema de huevo) para el desarrollo de organismos exigentes. Un medio común puede enriquecerse con estos suplementos.
• Medios selectivos: contienen sustancias inhibidoras que frenan el desarrollo de algunos grupos microbianos y favorecen el de otros de interés. Los medios líquidos de enriquecimiento permiten la recuperación y multiplicación de la flora de interés, inhibiendo la flora acompañante. Los medios selectivos para aislamiento son sólidos.
• Medios diferenciales: contienen sustancias indicadoras para evidenciar alguna propiedad bioquímica del microorganismo.

El medio de cultivo que se utilizará en la práctica es un medio artificial, especial y selectivo por aislamiento.

Esterilización del Material de Vidrio en el Laboratorio

¿Por qué es necesaria la esterilización?

La esterilización es la eliminación de todos los microorganismos vivos de un material. Es necesaria para prevenir que los gérmenes contaminantes interfieran con los resultados experimentales.

Diferencia entre Esterilización y Asepsia

Un objeto esterilizado está libre de microorganismos vivos, aunque puede contener gérmenes muertos. Un objeto aséptico, en cambio, no contiene ningún tipo de germen, ni vivo ni muerto.

Métodos de Esterilización de Material de Vidrio

• Flameado: se expone el material directamente a la llama hasta que se ponga al rojo vivo. La esterilización se logra por la carbonización del protoplasma bacteriano.
• Calor seco: se utiliza una estufa de esterilización a temperaturas entre 110 y 190 °C durante 2 horas. Las bacterias mueren por oxidación y deshidratación.
• Calor húmedo: se utiliza la acción penetrante del vapor para facilitar la coagulación de las proteínas celulares. Incluye la ebullición (15-20 minutos) y la esterilización en autoclave (recipiente hermético que soporta altas presiones y temperaturas). El autoclave es el método utilizado para esterilizar medios de cultivo.

Procedimiento para la Observación Microscópica de una Muestra

1. Colocar la muestra sobre un portaobjetos y cubrirla con un cubreobjetos.
2. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de uso y bajar la platina completamente.
3. Colocar el portaobjetos en la platina y sujetarlo con las pinzas.
4. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (o 10x para muestras bacterianas).
5. Acercar el objetivo a la muestra con el tornillo macrométrico, observando directamente y no a través del ocular para evitar dañar la muestra.
6. Alejar el objetivo con el tornillo macrométrico, ahora sí mirando por el ocular, hasta obtener una imagen nítida. Enfocar con precisión utilizando el tornillo micrométrico.
7. Para cambiar de aumento, puede ser suficiente ajustar el micrométrico; de lo contrario, repetir el proceso desde el paso 5.