Marcadores Genéticos RFLP y Vías de Transporte de Lípidos

Marcadores RFLP: Fundamentos y Aplicaciones

RFLP se refiere a secuencias específicas de nucleótidos en el ADN que son reconocidas y cortadas por las enzimas de restricción y que varían entre individuos. Los RFLP son marcadores génicos y se pueden encontrar en regiones que codifican proteínas o exones, en los intrones o en el ADN que separa un gen de otro. Lo único que necesitan para que puedan ser marcadores genéticos es que sean polimórficos, teniendo más de un alelo.

La técnica RFLP se usa como marcador para identificar grupos particulares de personas con riesgo a contraer ciertas enfermedades genéticas, en ciencia forense, en pruebas de paternidad y en otros campos. El ADN se extrae y se purifica. El ADN purificado puede ser amplificado usando PCR, luego es tratado con enzimas de restricción específicas para producir fragmentos de diferentes longitudes. Los fragmentos de restricción se separan mediante electroforesis en geles de agarosa y esto proporciona un patrón de bandas que es único para un ADN en particular debido a la diferencia en las secuencias del ADN en los individuos donde los sitios de restricción varían.

Cuando un RFLP se asocia con una enfermedad de origen genético, la presencia o ausencia de este puede usarse a modo de consejo sobre el riesgo de desarrollar o transmitir la enfermedad. Ejemplo: anemia falciforme.

Transporte y Metabolismo de Lípidos

Absorción Intestinal y Formación de Quilomicrones

Tras la formación de micelas, estas se acercan a la membrana apical del enterocito. Por endocitosis, los ácidos grasos y el 2-monoacilglicerol (2-MAG) atraviesan la membrana. Una vez dentro del citosol, son captados por una proteína y transportados al retículo endoplasmático (RE).

El colesterol necesita un transportador para pasar la membrana apical del enterocito. Una vez dentro, puede ir al RE y es esterificado para dar ésteres de colesterol (EC). El colesterol que no es esterificado puede ser secretado de nuevo hacia la luz intestinal.

Dentro del RE, se forman unas partículas pre-quilomicrones, formadas por triacilgliceroles (TAG), EC y ApoB-48. Estas partículas son envueltas en una estructura formando una vesícula (posiblemente una vesícula de transporte) que es el modo por el cual pueden viajar desde el RE al aparato de Golgi.

En el Golgi, los pre-quilomicrones maduran formando unas partículas que tienen baja concentración de EC y ApoB-48, y se incorpora ApoA-I, formando el quilomicrón maduro. Este atraviesa la membrana basolateral y va a la linfa y luego a la sangre, donde captan dos apolipoproteínas: ApoC-II y ApoE.

Estas estructuras se anclan a los vasos de los capilares del músculo esquelético y del tejido adiposo, gracias a la ApoC-II. La lipoproteína lipasa (LPL), activada por ApoC-II, hidroliza los TAG. Como resultado, se forman estructuras remanentes que contienen pequeñas cantidades de TAG y, por lo tanto, la proporción de EC es mayor. Estas remanentes pierden ApoC-II (y ApoC-I si estuviera presente) y solo contienen ApoB-48 y ApoE.

El destino de los remanentes de quilomicrones es el hígado, que tiene receptores para ApoE. En el hígado, los EC son utilizados para la síntesis de ácidos biliares y la cantidad que no se utiliza se excreta en la bilis.

Metabolismo de VLDL

El hígado sintetiza lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL). Están formadas por grandes concentraciones de TAG y bajas de EC, además de ApoB-100 y ApoE. En la vía sanguínea, captan ApoC-II y ApoE.

Las VLDL, mediado por la ApoC-II, se anclan al endotelio vascular de los capilares del músculo esquelético y del tejido adiposo, donde la lipoproteína lipasa (LPL) se expresa para escindir los TAG en 2-MAG y ácidos grasos libres, que son utilizados por los propios tejidos.

El resultado son partículas de densidad intermedia (IDL), con baja cantidad de TAG y una proporción mayor de EC. ApoC-II (y ApoC-I) se pierden y se mantienen ApoB-100 y ApoE.

Estas estructuras (IDL) van perdiendo TAG, en parte debido a la lipasa hepática. Existe una proteína transportadora de ésteres de colesterol (CETP) que facilita un intercambio: TAG desde IDL hacia HDL, y EC desde HDL hacia IDL.

Formación y Destino de LDL

Aproximadamente el 70% de las IDL pueden ser captadas por el hígado, donde existen receptores (receptor de LDL y receptor de ApoE). En el hígado son internalizadas; los EC son utilizados para la síntesis de ácidos biliares y el resto puede ser excretado por la bilis. La pequeña proporción de TAG remanente en las IDL es escindida por la lipasa hepática.

El 30% restante de las IDL, tras perder ApoE y casi todo el TAG, se convierten en lipoproteínas de baja densidad (LDL). Las LDL contienen principalmente EC y ApoB-100.

El destino de las LDL son dos lugares principales:

1. Tejidos periféricos extrahepáticos (gónadas, piel, corteza renal y placenta), donde el colesterol es utilizado para la síntesis de hormonas esteroideas.
2. El propio hígado, que posee receptores de LDL.

Cuando la concentración de LDL supera la capacidad de los tejidos extrahepáticos para captarlas y la capacidad del hígado para reciclarlas, pueden ser modificadas por oxidación. Estas LDL modificadas ya no son reconocidas eficientemente por los receptores de LDL en los tejidos periféricos ni por el propio hepatocito y, por lo tanto, se mantienen en circulación. Sin embargo, los macrófagos sí las reconocen y las internalizan, lo que puede llevar a la formación de células espumosas y al desarrollo de aterosclerosis.