Infección viral efectos patológicos

MÉTODOS DIRECTOS

1. Virus como partícula viral (ME)

2. Virus como agente infeccioso (aislamiento viral)

3. Presencia de AG virales (tec. Inmun, IF, test aglutinación)

4. Presencia de AANN virales (tec. Biología molecular: PCR)

ME → neces. Alta cantidad de viriones (109 partículas virales/ ml)
Heces diarrea: resultados positivos RÁPIDOS → ROTAVIRUS, ADENOVIRUS, CORONAVIRUS.

1AISLAMIENTO VIRAL CULTIVOS CELULARES (sensibilidad y especificidad muy alta, ya que solo se amplifica el virus)

• a partir de tejido/órgano

• Monocapa celular (que crece en un MC complejo: albúmina,vitaminas,sales)

CULTIVOS CELULARES:

C. Primario:

células, tejidos órganos SUBCULTIVAR 1 o 2 veces

Línea primaria:

tejido/órgano crecen hasta 50 SUBCULTIVOS (limitado)

Línea celular continua:

  tejido/órgano (tumor) que se mantiene en cultivo ilimitado
 

1. inoculación virus (sistema celular elegido)

2. incubación 35-37ºC 14 días, a las 24, 48 y 72h y después 2 veces a la semana (MO)

3. comparar con cultivos no inoculados (cambios morfológicos: efectos citopáticos...)

NO SE OBS, LOS VIRUS SINO LOS EFECTOS SOBRE LA Célula DEL Huésped
- muestra en el tubo + centrifuga (acelera la penetración del virus en la célula) a las48h de incubación ya podemos identificar las proteínas del virus mediante AC monoclonales esp. Marcados con florescencia

cultivo celular en monocapa de células activas que se adhieren a la superficie de un tubo fresco o cubreobjetos contenido en un Shell vial de fons pla

2INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA-

Se usa para identificar rápido el virus directamente sobre la muestra.

-porta: muestra (secar y fijar)   -Añadir AC marcados con partículas fluorescentes

3TEST DE AGLUTINACIÓN DIRECTO

--> detecta AG virales en muestras clínicas

1. AC antivirales esp. Fijados en: eritrocitos o partículas de látex

2. Reactivo se incuba con la muestra en la cual investigamos el AG

3. Aglutinación de partículas= hay AG (necesita otras pruebas complementarias)

SE USA SOBRE TODO PARA DETECTAR AG DE ROTAVIRUS EN HECES, RÁPIDO Y BARATO.

4PCR -

Identifica material genético vírico (ADN) (RT-PCR: ARN) - Copias

MÉTODOS INDIRECTOS

1. Producción de AC in vitro

2. Detectar AC esp antivirales por tec. Inm (inmunofl indirecta, Western blot)

1PRODUCCIÓN DE AC IN VITRO

Producción de anticuerpos (in vitro)

-
diagnóstico de la infección perinatal (de madre a hijo durante la gestación)

-

Diagnóstico primerizo de niños afectados por el VIH

Puedes saber si la persona tiene AC antiviricos producidos in vitro mediante linfocitos B extraídos de la sangre total, significa que el SI de esta persona ha sido estimulado por el virus.

2DETECCIÓN DE AC ESP ANTIVIRALES

Western Blot

-
---> Diagnóstico del HIV

Separa electroforeticamente proteínas virales que luego se inmovilizan en papel de nitrocelulosa para determinar presencia de anticuerpos específicos contra cada una de estas proteínas.

1.Cultivo celular grandes cantidades de virus → se inactivan → AG resultantes del lisado viral se separa por electroforesis.

2.AG separados → membranas de nitrocelulosa

3.Serum → membrana → AC anti IG unida a la peroxidasa/fosfatasa alcalina → sustrato → Bandas reactivas con color

Inmunofluorescencia indirecta

Detecta AC antivirales en serum.
(método rápido)

Porta: fijación de AG virales expresados en la superficie y citoplasma de células infectadas

1-Incubación del serum con células inf y no inf

2-Agregar AC anti IgG humana con florescencia

3-si es +: el conjugado se une a los AC del paciente (MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA) citoplasma y superficie de las células con fluorescencia

Test de aglutinación indirecto

Se buscan AC virales → usando partículas de látex recubiertas de AG viral