Identificación Bacteriana Rápida: Fundamentos y Resultados de Pruebas Bioquímicas Clave

Pruebas Bioquímicas Esenciales para la Identificación de Microorganismos

Este compendio detalla los fundamentos y procedimientos de las pruebas bioquímicas más utilizadas en el laboratorio de microbiología para la identificación y diferenciación de especies bacterianas.

Prueba de Catalasa

Función: Determinar la presencia de la enzima catalasa. Su función es descomponer el peróxido de hidrógeno (H₂O₂), que es tóxico para las bacterias, en oxígeno gaseoso (O₂) y agua (H₂O).

Resultados

• Catalasa Positiva (+): Producción de burbujas (liberación de O₂).
• Catalasa Negativa (-): Ausencia de burbujas.

Prueba de Oxidasa

Función: Determinar la presencia de la enzima oxidasa, encargada de la oxidación de los citocromos en la cadena de transporte de electrones.

Se espera que las bacterias aeróbicas sean Oxidasa positiva y las bacterias anaeróbicas sean Oxidasa negativa.

Resultados

• Oxidasa Positiva (+): Color azul-violeta.
• Oxidasa Negativa (-): Incolora.

Prueba de Coagulasa

Función: Detectar la presencia de la enzima coagulasa, que provoca la coagulación del plasma.

Procedimiento

Inocular colonias en plasma de conejo con anticoagulante EDTA.

Resultados

• Coagulasa Positiva (+): Coagulación del plasma.
• Coagulasa Negativa (-): No hay coagulación.

Prueba de DNasa

Función: Detectar la presencia de la enzima DNasa, que hidroliza el ADN. Se utiliza para diferenciar algunas especies bacterianas.

Resultados

• DNasa Positiva (+): Colonias rodeadas por un halo claro (ADN hidrolizado).
• DNasa Negativa (-): Sin hidrólisis del ADN.

Prueba de PYR (Pirrolidonil Arilamidasa)

Función: Identificación de cocos Gram positivos mediante la detección de una enzima que produce un color rojo brillante.

Procedimiento

1. Depositar la colonia en un disco impregnado de substrato PYR.
2. Incubar durante 2 minutos.
3. Agregar una gota de reactivo detector.

Resultados

• PYR Positiva (+): Color rojo.
• PYR Negativa (-): Sin cambios de color.

Hidrólisis del Hipurato

Función: Detectar la enzima hipuricasa.

Procedimiento

1. Inocular la bacteria en medio con hipurato.
2. Incubar 2 horas.
3. Añadir reactivo revelador.

Resultados

• Hipurato Positiva (+): Color violeta intenso (hidrólisis del hipurato).
• Hipurato Negativa (-): Incoloro o amarillento.

Prueba de Rojo de Metilo (MR)

Función: Detección de bacterias que realizan fermentación ácido-mixta.

Si hay fermentación positiva, los productos ácidos mixtos provocan un cambio de pH, resultando en color rojo gracias al indicador de pH Rojo de Metilo.

Resultados

• MR Positiva (+): Color rojo.
• MR Negativa (-): No hay cambio de color.

Prueba de ONPG (Orto-nitrofenil-β-D-galactopiranósido)

Función: Detectar la presencia de β-galactosidasa (enzima clave en la fermentación de lactosa). Se utiliza para diferenciar fermentadores lentos de lactosa de los no fermentadores.

Procedimiento

Inocular el microorganismo sobre un disco con ONPG y realizar 4 horas de incubación.

Resultados

• ONPG Positiva (+): Disco amarillo (presencia de β-galactosidasa).
• ONPG Negativa (-): Disco incoloro (ausencia de β-galactosidasa).

Prueba de Voges-Proskauer (VP)

Función: Detección de bacterias que realizan fermentación butanodiólica.

Nota: Se espera que las bacterias que son Rojo de Metilo positivo (MR+) sean Voges-Proskauer negativo (VP-) y viceversa.

Medio Bilis Verde Brillante (BVB)

Función: Detección de coliformes totales, basada en la fermentación de la lactosa y la producción de gas. El medio inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas.

Prueba de Amilasa

Función: Detectar la actividad de la enzima amilasa (hidrólisis del almidón).

Procedimiento

Tras la incubación, se añade yodo o Lugol a la placa.

Resultados

• Amilasa Positiva (+): La bacteria degrada el almidón, resultando en un halo sin color alrededor de la colonia.
• Amilasa Negativa (-): No hay degradación del almidón; el medio se tiñe de color negro.

Prueba de Caseinasa

Función: Detección de la actividad de la enzima Caseinasa (hidrólisis de la caseína).

Procedimiento

Inoculación sobre un medio de cultivo que contiene leche (caseína).

Resultados

• Caseinasa Positiva (+): Halo transparente alrededor de la colonia (la caseína desaparece del medio).
• Caseinasa Negativa (-): El medio permanece blanco (la caseína no es hidrolizada).

Prueba de Ureasa

Función: Determinar la capacidad de la bacteria de hidrolizar la urea, formando moléculas de amoníaco por acción de la enzima ureasa. Se utiliza rojo fenol como indicador.

Resultados

• Ureasa Positiva (+): Medio rojo-rosado intenso.
• Ureasa Negativa (-): Conserva su color original (amarillo).

Prueba de Indol

Función: Detectar microorganismos que degradan el triptófano, produciendo indol.

Resultados

• Indol Positiva (+): Anillo rojo en la superficie del medio.
• Indol Negativa (-): Sin cambio de color.