Guia d'Immunohistoquímica i Tècniques de Tinció

Característiques de la unió Ag-Ab

• Afinitat: Ajust 3D, mesura de la força d'unió.
• Aviditat: Força funcional de combinació (un cop units Ag-Ac).
• Especificitat: Unió selectiva. Reaccions creuades (que un mateix Ac no es pugui unir a un Ag mentre ja està unit a un altre).
• Sensibilitat: Quantitat relativa d'antigen que una tècnica és capaç de detectar.
  • Una tècnica molt sensible és capaç de detectar mínimes quantitats d'antigen.
  • Per detectar la mateixa quantitat d'antigen, una tècnica més sensible ens donarà més senyal que una tècnica menys sensible.

Mètodes d'Immunohistoquímica (IHQ)

• Directe: Més senzilla de realitzar, però comporta més problemes de pèrdua d'especificitat. Ab primari marcat. Alteració de la reactivitat deguda al marcatge. Ac + cromogen + fluorocrom.
• Indirecte: (Ac primari + Ac secundari). Ab primari no marcat, Ab secundari marcat. Espècies diferents. Amplificació de senyal. Un sol Ac secundari per múltiples Ac primaris diferents. No hi ha pèrdua d'especificitat de l'Ag.

Anticossos: Policlonals vs. Monoclonals

Anticossos Policlonals

Mescla d'anticossos que actuen contra diferents epítops d'un mateix antigen.

• Avantatges: Major espectre de reactivitat, producció senzilla, ràpida i més barata.
• Limitacions: Major probabilitat de reaccions creuades (s'uneixen en una zona no desitjada de l'Ag). Impossible de reproduir. Purificació laboriosa.

Anticossos Monoclonals

Mescla d'anticossos idèntics: reconeixen el mateix epítop i tenen la mateixa afinitat. Produïts per cèl·lules provinents del mateix precursor (limfòcit B).

• Avantatges: Font il·limitada d'Ac, elevada especificitat, no cal purificar.
• Limitacions: Limitació interespècies, procediment d'obtenció costós, menor concentració.

Tècniques de Tinció

Glúcids

• PAS: Demostració de grups aldehid. Àcid periòdic (oxidació) → Reactiu de Schiff (unió a grups aldehid) → Rentat aigua corrent (color) → Hematoxilina (contrast).
• PAS-Diastasa: Identificació de grànuls de glucogen. La diastasa (enzims α-amilasa) trenca el glucogen. Es realitza en paral·lel amb PAS convencional per comparar (les zones no tenyides en el PAS-diastasa són els grànuls de glucogen).
• Mucicarmí: Colorant carmí unit a sals d'alumini. Demostra mucines àcides secretades per cèl·lules epitelials i la càpsula de Cryptococcus. Contrast: Hematoxilina i groc de metanil.
• Blau Alcià: Colorant bàsic amb coure. Tinció selectiva de mucopolisacàrids segons el pH. Contrast: Fast Red.
• Ferro Col·loidal: Afinitat de mucines àcides per ions de ferro a pH baix. Reacció de Blau de Prússia. Molt sensible, menys específic que el blau alcià.

Amiloide

• Roig Congo: pH bàsic (hidròxid de sodi), tall gruixut (7-8 μm). Vermell-taronja. Diferencia amiloide primari vs. secundari.

Lípids

• Oil Red O: Fetge.
• Sudan Black B: Fibres musculars.