Guia d'Anàlisi Microbiològica de l'Aigua: Indicadors i Mètodes

Microorganismes Indicadors en Aigües

Els microorganismes indicadors són essencials per avaluar la qualitat de l'aigua. Han de complir diverses característiques:

• Ser fàcils d'aïllar i cultivar.
• Ser relativament innocus per al personal de laboratori.
• La seva presència ha d'estar relacionada amb la de patògens o aïllaments complicats.
• Sempre que es detecti un patogen, el microorganisme indicador ha d'estar present.

Normativa Aplicable a les Aigües

• Aigües potables: RD 3/2023
• Aigües envasades: RD 1798/2010
• Aigües de bany: RD 1341/2007
• Piscines: D 95/2000

Grups de Microorganismes Analitzats

Coliformes

Són enterobacteris gramnegatius (G-) que fermenten la lactosa a 35-37 °C. Inclouen gèneres com E. coli, Klebsiella, Enterobacter i Citrobacter. Poden ser d'origen animal, sapròfits independents o microorganismes intestinals.

Estreptococs Fecals

Bacteris grampositius (G+) que inclouen Streptococcus (origen animal) i Enterococcus (origen humà). Creixen en un medi amb Bilis-Esculina. La seva presència es confirma si creixen en un medi amb NaCl al 6,5%. El ràtio Coliformes Fecals / Estreptococs Fecals (CF/EF) pot indicar l'origen de la contaminació (> 4, 4 - 0,7, < 0,7).

Bacteris Aerobis Totals

Aquest recompte estima la flora total sense especificar espècies, incubant a 22 °C i 37 °C. És un indicador de l'eficàcia del tractament de potabilització.

Clostridium perfringens

Bacils grampositius (G+) i anaerobis, causants de malalties com el tètanus, el botulisme i la gangrena gasosa. Són presents a l'intestí de l'ésser humà i alguns animals, al terra o a l'aigua. Són resistents al tractament de potabilització i toleren canvis de temperatura, pH i escassetat de nutrients (formes de resistència ARU i ARI).

• Prova presuntiva: medi m-CP.
• Confirmació: amb NF₃ (color lila), utilitzant una gerra GasPak per crear condicions d'anaerobiosi.

Pseudomonas aeruginosa

Bacils gramnegatius (G-), aerobis i psicròfils, sovint trobats en capes freàtiques i amb pocs nutrients. Són oxidasa i catalasa positius, no formen espores i poden produir pigments (verd, blau, vermell, marró). Poden causar infeccions urinàries, intestinals, d'oïda i en ferides.

Salmonella

Bacils gramnegatius (G-), anaerobis facultatius, sense càpsula ni espores. Produeixen sulfur d'hidrogen, no fermenten la lactosa i són catalasa positius.

Mètodes d'Anàlisi i Cultiu

Tècniques de Sembra

• Laminocultiu: Tècnica de cultiu en superfície.
• Nansa de Drigalski: Instrument per a la sembra en extensió.

Medis de Cultiu

• Medi selectiu i diferencial:
  • Agar TTC: E. coli (colònies verd-blau per galactosidasa i glucuronidasa) i altres coliformes (rosa per galactosidasa).
  • Agar CCA (Chromogenic Coliform Agar)
• Medi selectiu:
  • Per a aerobis totals: Triptona Soja Agar (TSA) o Plate Count Agar (PCA).
  • m-CP: Per a Clostridium perfringens (colònies liles).
  • Agar Cetrimida: Per a Pseudomonas (colònies blanques).
• BLBVB amb campana de Durham: Per a la detecció de gas en coliformes fecals i E. coli.

Proves Bioquímiques

Proves IMViC

Sèrie de proves per a la identificació d'enterobacteris.

• Indol: Detecta la producció d'indol a partir del triptòfan amb el reactiu de Kovacs.
• Roig de Metil: Detecta la fermentació àcida mixta de sucres (positiu per a E. coli).
• Voges-Proskauer: Detecta la fermentació butanodiòlica de la glucosa.
• Citrat: Avalua la capacitat d'utilitzar el citrat com a única font de carboni. Positiu per a Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter i Salmonella (el medi vira de verd a blau).
• Kligler (KIA): Avalua la fermentació de lactosa, glucosa i la producció de H₂S.

Galeries Comercials

• API 20E: Es prepara una suspensió d'una colònia en 5 ml d'aigua i s'inocula la galeria. S'incuba 12-24 hores a 37 °C. El revelatge es fa afegint reactius a les cúpules TDA, VP i IND, i es realitza la prova de l'oxidasa.
• Microgen GN-ID (GN A): Per a la identificació d'enterobacteris (glucosa +, oxidasa -, nitrat +).

Anàlisi de Virus i Paràsits

Virus

El procés inclou ultrafiltració, adsorció, elució, centrifugació i precipitació. La detecció es realitza mitjançant cultiu en línies cel·lulars in vitro per determinar les Unitats Formadores de Placa (UFP).

Protozous

1. Filtrar entre 10 i 400 litres d'aigua i refrigerar la mostra durant 48 hores.
2. Es centrifuga el sediment i es resuspèn en formaldehid al 25%.
3. S'afegeix una solució de sulfat de zinc i es torna a centrifugar.
4. El sediment es tenyeix amb Lugol i s'observa al microscopi.

Helmints

• Nematodes: Cucs cilíndrics.
• Platihelmints: Cucs plans.

Presa de mostres: Es necessiten 5 litres per a aigua contaminada i de 20 a 50 litres per a aigua potable. Per concentrar els ous, s'utilitza una solució de sulfat de zinc (ZnSO₄) amb una densitat major a la de l'aigua per fer-los flotar a la superfície, on es recullen per a l'observació.