Genoma humano: ADN de copia única y ADN repetitivo, técnicas FISH, MLPA y variantes de PCR
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El genoma humano: ADN de copia única y ADN repetitivo
El genoma humano está compuesto por dos grandes grupos de secuencias: ADN de copia única y ADN repetitivo.
ADN de copia única
ADN de copia única: comprende secuencias codificantes, como los exones, y no codificantes, como los intrones y el ADN intergénico.
ADN repetitivo
ADN repetitivo: comprende secuencias codificantes, como las familias génicas, y no codificantes, como el ADN satélite, los minisatélites, los microsatélites y las secuencias repetitivas dispersas SINE (Alu) y LINE (Kpn).
Notación del cariotipo
Individuo 46 cromosomas, con cromosomas sexuales XY, correspondientes al sexo masculino. El símbolo (?) indica que existe incertidumbre respecto al tipo o la naturaleza de la alteración cromosómica que afecta al cromosoma 1; es decir, no se puede identificar con certeza qué tipo de alteración presenta. El símbolo (~) indica un intervalo de localización, por lo que la alteración se ubica entre las bandas q21 y q24 del brazo largo del cromosoma 1.
Microduplicación y variación en el número de copias
La microduplicación es una variación en el número de copias (CNV) que produce una copia adicional de un segmento cromosómico. Puede originarse por una recombinación homóloga no alélica entre secuencias repetidas. Para confirmar el diagnóstico, se puede utilizar FISH con una sonda específica para la región 17p11.2, marcada con un fluoróforo, que permita detectar la copia adicional. También se puede utilizar MLPA, técnica que permite detectar microduplicaciones mediante el análisis de la cantidad de copias de ADN.
Técnicas de diagnóstico molecular
FISH
Utiliza una sonda fluorescente específica para localizar una región del cromosoma y visualizar las señales. Por ejemplo, una sonda dirigida a 17p11.2.
MLPA
Analiza la dosis genética mediante sondas que se hibridan, se ligan y se amplifican. Permite detectar ganancias y pérdidas de material genético.
Etapas de la PCR convencional
Desnaturalización, hibridación de los cebadores y elongación. Etapas de PCR convencional.
Variantes de PCR: aprende para qué sirve cada una
qPCR | PCR cuantitativa en tiempo real. Detecta y cuantifica productos de amplificación durante la reacción. |
QF-PCR | PCR cuantitativa fluorescente. Analiza STR de los cromosomas 13, 18, 21, X e Y. Se utiliza en diagnóstico prenatal de aneuploidías. |
RT-qPCR | PCR cuantitativa con retrotranscripción. Permite cuantificar indirectamente ARN mensajero a partir de ADNc. Utiliza retrotranscriptasa. |
MS-PCR | PCR metilación específica. Se utiliza para estudiar alteraciones de metilación. |
MLPA | Amplificación múltiple de sondas ligadas. Detecta cambios en la dosis genética, incluidas microdeleciones y microduplicaciones. |
Fundamento de la técnica FISH
La técnica FISH se basa en la complementariedad de bases del ADN. Utiliza una sonda de ADN específica, marcada con un fluoróforo, que se une a la secuencia complementaria de interés en la muestra.
Pasos del protocolo
Pasos del protocolo:
- Desnaturalización: se separan las dos hebras del ADN.
- Adición de sondas: se incorporan sondas específicas marcadas con fluoróforos.
- Hibridación: la sonda se une a la secuencia complementaria.
- Detección: se observan las señales mediante microscopía de fluorescencia.
Consideraciones principales
Consideraciones principales: aumenta la resolución respecto al cariograma convencional y permite detectar alteraciones cromosómicas, como microdeleciones y microduplicaciones, en metafase o interfase.