Fundamentos y Tecnología de los Contadores Hematológicos: De la Resistencia Eléctrica a la Citometría de Flujo

Principios de Clasificación Celular

Los impulsos pasan al discriminador, que los clasifica por tamaños. Distintos tamaños corresponden a distintas células.

Métodos Ópticos o de Dispersión Lumínica

Este método hace pasar las células individualmente, incide un haz de luz y analiza la dispersión de la misma. La luz dispersada es recogida por sensores específicos y la medición dependerá del tamaño, forma e índice de refracción (IR) de la célula. Tipos:

• Campo Oscuro: Las células atraviesan una zona donde incide un haz de luz halógena. Si no hay células, la luz no se desvía e incide en el disco oscuro, por lo que el fotodetector no absorbe nada. Si hay células, la luz dispersada se dirige parcialmente al disco y parcialmente al fotodetector, variando la señal según las características de la célula.
• Rayo Láser: Las células pasan aisladamente por una cámara de flujo pequeña. En un punto, cada célula es atravesada por un rayo que incide sobre un sensor. Cuando una célula se interpone, el rayo se desvía y no incide en el sensor. Este proceso se complementa con otros sensores de dispersión estimulados por los rayos desviados.

Tipos de Contadores Hematológicos

Todos los contadores son capaces de contar células discriminando entre tipos; los más sofisticados identifican subtipos de leucocitos (leuco). Cuanto mayor es la concentración de células, mayor es la dilución requerida (más para eritrocitos que para leucocitos). Tipos:

Contadores de 1 Población

• Cuentan hematíes, leucocitos y plaquetas. Utilizan 2 canales: uno para leucocitos (registra impulsos grandes) y otro para hematíes y plaquetas (no registra impulsos grandes). Utilizan un dispositivo de resistencia eléctrica.

Contadores de 3 Poblaciones

• Diferencian tres grupos de tamaño: pequeñas (linfocitos), medianas (monocitos, eosinófilos, basófilos y linfocitos grandes) y grandes (neutrófilos). Utilizan dos canales, similar al contador de 1 población.

Contadores de 5 Poblaciones

Permiten el recuento diferencial de linfocitos, monocitos, basófilos, eosinófilos y neutrófilos, además de plaquetas y hematíes (incluyendo la medición de hemoglobina [Hb]).

Utilizan 4 canales:

• Canal de Peroxidasas: Mide tipos de leucocitos según su tamaño y actividad peroxidásica. La sangre diluida que pasa por este canal (leucocitos) es tratada con un reactivo que rompe los hematíes y provoca una reacción citoquímica. Esta reacción pone de manifiesto la actividad peroxidásica, dando una coloración gris oscura al citoplasma.

El sistema óptico cuenta con un prisma que divide los haces de luz en dos: uno es recogido por un fotómetro que detecta la intensidad de la tinción, y el otro se dirige a un disco oscuro delante del fotodetector, que recogerá la información del volumen celular.

Identificación Celular por Actividad Peroxidásica:

• Linfocitos: No presentan actividad peroxidásica (act. peroxi).
• Monocitos y Basófilos: Presentan ligera actividad.
• Neutrófilos: Presentan actividad cargada.
• Eosinófilos: Presentan actividad muy cargada.

Los monocitos y basófilos, al tener actividad peroxidásica parecida, se distinguen por la afinidad de la granulación de los basófilos por el colorante Azul Alcian.

• Canal de Basófilos: Se emplea para diferenciar basófilos. La sangre es tratada de forma similar al canal de peroxidasa.
• Canal de Hematíes y Plaquetas: Posee un sistema óptico que recoge la luz dispersada por las células y la dirige a un prisma que divide el haz de luz en dos, dirigidos a sensores específicos de cada tipo de célula.
• Canal de Hemoglobina (Hb): Se produce la reacción de la cianmetahemoglobina.

Citómetro de Flujo

Utiliza el método de dispersión del rayo láser, pero incorpora detectores con filtros que solo detectan luz fluorescente. Es el único aparato que permite diferenciar Linfocitos B y T, y dentro de los T, los subtipos T₄ y T₈.

Presentación de Resultados Hematológicos

• Listados (incluyen tipos de células, valor medido y unidades).
• Polígonos de frecuencia.
• Diagramas de dispersión (Scattergrams).