Fundamentos y Técnicas de Recuento y Tinción Celular en Hematología Clínica

Prácticas de Laboratorio Hematológico

Recuento Manual de Leucocitos

El volumen del bulbo es 10 veces superior al del capilar. La dilución se realiza al **1/20**. Se llena la pipeta hasta 0,5 y se completa con líquido hasta la marca 11.

Líquidos de Tinción Nuclear

Se utilizan líquidos que tiñan los núcleos, como el de **Türck**:

• **Ácido acético glacial**: Provoca la lisis de los eritrocitos.
• **Violeta de genciana**: Tiñe el núcleo de los leucocitos.

Para el procedimiento manual: Se usan 0,38 ml de Líquido de Türck o 20 microlitros de sangre.

Fórmula: nº leucocitos / 4 x 200 (Nota: Esta fórmula debe ser verificada según el protocolo específico de la cámara de recuento utilizada).

Valores Normales (V.N.): 4.000 - 9.000 leucocitos/mm³.

Tinciones Hematológicas

Tinción Panóptica

Esta tinción ofrece **menor resolución** que MGG/Wright, pero es **más rápida**.

Se utilizan 3 soluciones:

1. Disolución metílica de trianilmetano.
2. Disolución tamponada de xanteno.
3. Disolución tamponada de tiazina.

Procedimiento: Sumergir 5 veces durante 1 segundo. Lavar la extensión con **agua destilada** hasta eliminar el colorante (de cola a cabeza). Se pueden variar las inmersiones 2 y 3 según se desee un color más rosa o más azul.

Tinción de Wright

Utiliza metanol (que contiene eosina y una mezcla de azul de metileno y azur B) de colorantes tipo **Romanovsky**, que teñirán dependiendo de su carácter ácido o básico.

Procedimiento:

1. Cubrir con Wright un volumen conocido durante **2 minutos**.
2. Añadir el mismo volumen de **agua destilada**, soplando con la pipeta para homogeneizar, durante **4 minutos**.
3. Lavar con agua destilada.

Tinción de Giemsa

Compuesta por metanol al 50% de eosina (ácido) y azur y azul de metileno (básicos), y glicerina al 50%.

Procedimiento:

1. Cubrir con metanol durante **4-5 minutos**.
2. Decantar para eliminar el metanol.
3. Cubrir con Giemsa (1g/9ml de diluyente) y dejar **25 minutos**.
4. Lavar con agua destilada.

Tinción M-G (May-Grünwald)

Utiliza metanol de eosina (ácido) y azul de metileno (básico).

Procedimiento:

1. Cubrir con un volumen conocido de M-G durante **3 minutos**.
2. Añadir el mismo volumen de **agua destilada** y soplar durante **10 minutos**.
3. Lavar hasta eliminar el colorante.

Tinción M-GG (May-Grünwald Giemsa)

Procedimiento:

1. Cubrir con un volumen conocido de M-G durante **3 minutos**.
2. Añadir el mismo volumen de **agua destilada** y soplar durante **3 minutos**.
3. Verter por decantación.
4. Cubrir con Giemsa diluido (5/45) durante **20 minutos**.
5. Lavar con agua destilada.

Índices de Madurez Neutrofílica

Índice de Arneth

Mide los índices de **lobularidad** que se usan para evaluar el grado de madurez de los **neutrófilos**.

Fórmula: (nº de lóbulos / nº de neutrófilos) x 100

Valores de Referencia: 1,9 - 3,0.

• **< 1,9 (Desviación a la izquierda):** Indica inmadurez, común en **infección aguda** o neutropenia.
• **> 3,0 (Desviación a la derecha):** Indica madurez excesiva, común en **anemia megaloblástica** o variación morfológica constitucional.

Índice de Schilling

Clasifica los neutrófilos según su madurez:

• **Juveniles:** Mielocitos, metamielocitos y neutrófilos en banda o cayado.
• **Maduros:** Neutrófilo segmentado.

Fórmula: % juveniles / % segmentados = 1 / (segmentados / juveniles)

Si **aumentan los juveniles**, hay desviación a la izquierda. Si **aumentan los segmentados**, hay desviación a la derecha.

Recuentos Automáticos en Hematología

Los recuentos automáticos se basan en varios elementos básicos:

• **Diluidor:** Diluye la sangre a la concentración adecuada.
• **Cámara de flujo:** Permite que la muestra fluya para que las células pasen de forma aislada. Debe tener un sistema de aspiración.
• **Dispositivo de medida:** Acoplado a la cámara, detecta el paso de células.
• **Transductor:** Convierte las señales físicas en datos electrónicos.
• **Sistema informático:** Procesa los datos.
• **Lectora/Impresora:** Muestra los resultados.

Dispositivos de Medida

Detectan el paso de la célula aprovechando la interferencia que esta produce al paso de una **corriente eléctrica** o de luz.

Principio de Resistencia Eléctrica (Método Coulter)

Se basa en que las células conducen **menos electricidad** que el líquido diluyente. La sangre es diluida con un diluyente **conductor isotónico** (conductor para que conduzca electricidad, isotónico para que no rompa las células).

La sangre pasa por un pequeño orificio que hace que las células pasen alineadas y aisladas. A los lados del orificio hay dos electrodos de platino que establecen una corriente eléctrica constante.

• Si solo atraviesa líquido, la resistencia medida es mínima y constante.
• Cuando pasa una célula, hay un **aumento de resistencia eléctrica** y un cambio de potencial entre los electrodos, recogido por el transductor.

El **número de señales eléctricas** indica el número de células. La amplitud es proporcional al tamaño:

• Célula pequeña (plaqueta): Impulso pequeño.
• Eritrocito: Impulso intermedio.
• Leucocito: Impulso mayor.