Fundamentos y Procedimientos de las Técnicas de Tinción en Microbiología

Técnicas de Tinción en Microbiología

1. Tinción simple (cebolla, mucosa bucal)

Las células bacterianas en medios de pH neutros suelen presentar una débil carga negativa. Por lo tanto, la bacteria cargada negativamente se combinará con los iones positivos de los colorantes de tipo básico (azul de metileno, cristal violeta, fucsina fenicada).

2. Tinción negativa (tinta china)

Los colorantes ácidos, como la eosina y la nigrosina, presentan iones negativos que no podrán teñir la célula; en su lugar, se depositan alrededor de esta, consiguiendo una imagen más real del tamaño y la forma celular.

Las cápsulas pueden observarse directamente mediante tinción negativa con tinta china. Este colorante está compuesto por partículas finas de carbón suspendidas en agua, formando un auténtico coloide. Las partículas son demasiado grandes para penetrar a través de la matriz de la cápsula, por lo que solo se teñirá el medio circundante.

3. Tinción de Gram (Staphylococcus aureus, Escherichia coli y mezcla de ambos)

Desarrollada por Christian Gram en 1884, permite diferenciar dos grandes grupos bacterianos:

• Gram (+): Se tiñen de violeta. Poseen una pared monoestratificada formada por una gruesa capa, amorfa y densa, de mucopolisacáridos (mureína). Esta densa capa evita la extracción del complejo cristal-violeta-yodo por el disolvente (alcohol o acetona).
• Gram (-): Poseen una pared multiestratificada de mayor complejidad. Se tiñen de rosa con el colorante de contraste (safranina). Están formadas por una capa de mureína más delgada y, sobre ella, una capa de lípidos, lo que aumenta la tinción diferencial.

Procedimiento de la tinción de Gram

La tinción de Gram requiere el uso de 4 soluciones:

1. Primer colorante (Cristal violeta): Colorante básico que, en contacto con las células cargadas negativamente, reacciona con ellas tiñéndolas a todas de azul. (Tiempo: 1 min). Resultado: Gram (+) violeta, Gram (-) violeta.
2. Solución mordiente (Lugol): No tiene color. Fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el primer colorante y las células. (Tiempo: 1 min). Resultado: Gram (+) se fija coloración, Gram (-) se fija coloración.
3. Agente decolorante (Alcohol-acetona): Disolvente orgánico que decolorará un tipo de bacterias (las Gram -), las cuales serán teñidas posteriormente con el colorante de contraste. (Tiempo: 30 seg). Resultado: Gram (+) permanecen violetas, Gram (-) se decoloran.
4. Colorante de contraste (Safranina): Colorante básico de distinto color que el primero. (Tiempo: 1 min). Resultado: Gram (+) permanecen violetas, Gram (-) se tiñen de rojo/rosa.