Fundamentos de Microbiología Clínica: Muestras, Patógenos y Métodos

Toma de Muestra y Biota Normal

Tipos de Muestra

Las muestras biológicas pueden ser de diversos tipos, incluyendo líquidos (sangre, orina, LCR), tejidos (biopsias) e hisopados de diferentes superficies.

Requisitos de una Muestra Adecuada

• Recolectar la muestra del sitio real de la infección.
• Evitar la contaminación con microbiota comensal.
• Tomar la muestra antes de iniciar un tratamiento con antibióticos, si es posible.
• Asegurar una cantidad suficiente y un etiquetado completo.

Rotulación Obligatoria

Toda muestra debe estar correctamente identificada con: nombre del paciente, número de identificación (ID), origen de la muestra, médico solicitante, fecha y hora de recolección, y nombre del responsable de la toma.

Medios de Transporte Comunes

• Medio de Stuart: Ideal para exudados faríngeos, nasales, entre otros.
• Medio de Cary-Blair: Utilizado principalmente para el transporte de muestras fecales.
• Muestras para anaerobios: Se deben transportar en una jeringa sellada o en un medio con CO₂ libre de O₂.

Es crucial sembrar la muestra lo antes posible para garantizar la viabilidad de los microorganismos.

Género Pseudomonas

Características

• Bacilo Gram negativo, aerobio estricto, no fermentador y flagelado (móvil).
• Temperatura óptima de crecimiento: 37°C.
• Produce pigmentos característicos como la piocianina (azul-verdoso) y la fluoresceína (amarillo-verdoso, fluorescente).
• Se cultiva en medios como EMB, MacConkey, Agar Desoxicolato-Citrato y, de forma selectiva, en Agar Cetrimida (Pseudocel).
• Produce endotoxinas y presenta un olor característico (similar a uvas).

Pruebas Bioquímicas

• Prueba TSI (Triple Sugar Iron): No fermenta glucosa, lactosa ni sacarosa (pico y fondo alcalinos).
• Medio OF (Oxidación-Fermentación): Demuestra su metabolismo oxidativo.
  • Tubo abierto (aerobio) amarillo y tubo cerrado (anaerobio) verde indica un metabolismo oxidativo.
  • Ambos tubos amarillos indican un metabolismo fermentativo.
  • Ambos tubos verdes indican un metabolismo no sacarolítico (inerte).
• Prueba SIM: Positiva para la movilidad.
• Agar F (Fluoresceína): Se observa fluorescencia bajo luz de Wood para detectar la fluoresceína.

Infecciones de Transmisión Sexual (ITS)

Agentes Más Comunes

• Neisseria gonorrhoeae: Gonorrea
• Chlamydia trachomatis: Clamidiasis
• Treponema pallidum: Sífilis
• Trichomonas vaginalis: Tricomoniasis
• Candida albicans: Candidiasis vulvovaginal
• Haemophilus ducreyi: Chancro blando
• VHS, VPH, VIH: Infecciones virales

Células Clave (Clue Cells)

Son células epiteliales vaginales completamente recubiertas por cocobacilos. Su presencia es un criterio diagnóstico clave para la vaginosis bacteriana, comúnmente asociada a Gardnerella vaginalis.

Lactobacillus sp.

Componente principal de la flora vaginal normal en mujeres sanas. Su metabolismo produce ácido láctico, manteniendo el pH vaginal ácido (entre 3.8 y 4.5), lo que inhibe el crecimiento de patógenos.

Diagnóstico de N. gonorrhoeae

• Medios de cultivo: Requiere medios enriquecidos como el Agar Chocolate y medios selectivos como Thayer-Martin, incubados en una atmósfera con CO₂.
• Tinción de Gram: Se observan diplococos Gram negativos intracelulares (dentro de los leucocitos).
• Pruebas bioquímicas: Oxidasa positiva y fermenta únicamente la glucosa.

Análisis de Exudado Vaginal

• Leucocitos aumentados: Indican un proceso inflamatorio o infeccioso.
• Ausencia de lactobacilos: Sugiere un desequilibrio en la microbiota (disbiosis).
• Trichomonas vaginalis: Se observa como un protozoario flagelado y móvil en el examen en fresco.
• Levaduras y pseudohifas: Son indicativas de una candidiasis vaginal.

Infecciones de las Vías Urinarias (IVU)

Definición

Es una infección causada por microorganismos, principalmente bacterias, que afecta cualquier parte del tracto urinario. Puede afectar:

• Uretra (uretritis)
• Vejiga (cistitis)
• Riñones (pielonefritis)

Agentes Más Comunes

• Escherichia coli: Responsable de aproximadamente el 80% de los casos.
• Otras enterobacterias como Proteus sp., Klebsiella sp. y Enterobacter sp.
• Staphylococcus saprophyticus: Causa común en mujeres jóvenes sexualmente activas.
• Pseudomonas aeruginosa: Frecuente en infecciones nosocomiales o asociadas a catéteres.

Síntomas

Los síntomas comunes incluyen disuria (dolor al orinar), tenesmo vesical, urgencia miccional y dolor suprapúbico. La fiebre y el dolor lumbar suelen indicar una infección más grave, como la pielonefritis.

Diagnóstico

• Urocultivo: Es el estándar de oro. La muestra se obtiene por la técnica del chorro medio y se siembra en medios como Agar CLED y Agar Sangre.
• Interpretación del recuento: Un recuento superior a 100,000 Unidades Formadoras de Colonias por mililitro (UFC/mL) se considera indicativo de infección significativa (criterio de Kass).
• Tinción de Gram: Permite una visualización rápida de bacterias y leucocitos en la orina.
• Examen General de Orina (EGO): Hallazgos sugestivos incluyen piuria (presencia de leucocitos), bacteriuria y nitritos positivos.

Microorganismos Anaerobios

Características

• Son microorganismos que no pueden crecer en presencia de oxígeno atmosférico.
• Se clasifican en anaerobios estrictos (el oxígeno es tóxico) y aerotolerantes (pueden sobrevivir pero no crecer en presencia de oxígeno).
• Forman parte de la microbiota normal del tracto gastrointestinal, la cavidad oral y el tracto genital femenino.

Patógenos Comunes

• Bacteroides fragilis
• Clostridium perfringens, C. difficile, C. tetani
• Fusobacterium, Prevotella, Peptostreptococcus

Enfermedades Asociadas

Causan infecciones profundas y polimicrobianas, como abscesos, gangrena gaseosa (causada por C. perfringens) y colitis pseudomembranosa (causada por C. difficile). Son comunes en infecciones postquirúrgicas y en infecciones derivadas de mordeduras.

Manejo en Laboratorio

Instrumentos y Materiales para Anaerobiosis

• Jarra de anaerobiosis: Contenedor hermético que utiliza un sobre generador de gas (H₂ y CO₂) y un catalizador de paladio para eliminar el oxígeno.
• Bolsas o sistemas comerciales (tipo GasPak): Alternativa a las jarras para incubar un número menor de placas.

Medios de Cultivo Especiales

• Caldo Tioglicolato: Medio líquido que permite el crecimiento de anaerobios en el fondo del tubo, donde la concentración de oxígeno es mínima.
• Medios sólidos: Se utilizan agares enriquecidos y prerreducidos como el Agar Schaedler o el Agar Sangre Anaerobio CDC, suplementados con hemina y vitamina K (menadiona).

Indicadores de Anaerobiosis

Se utiliza azul de metileno, un indicador de óxido-reducción que se vuelve incoloro en condiciones de anaerobiosis y permanece azul en presencia de oxígeno.

Toma y Transporte de Muestra

La recolección debe realizarse mediante aspiración con jeringa, eliminando el aire y sellándola, o utilizando viales de transporte anaeróbico. Es fundamental evitar el contacto de la muestra con el oxígeno en todo momento.