Fundamentos de Micología y Métodos de Recuento Microbiano en Laboratorio

Características Generales de los Hongos

Los hongos son organismos eucariotas, sin clorofila e inmóviles. Algunos son unicelulares. Ecológicamente, pueden ser saprófitos, parásitos, hiperparásitos o simbiontes. Tienen la capacidad de reintegrar al suelo sustancias extraídas por las plantas.

Otros hongos son perjudiciales para el hombre o las plantas, destacando los hongos fitopatógenos.

• Hongos del género Aspergillus producen aflatoxinas que provocan enfermedades en el hombre y/o en los animales, tales como afecciones hepáticas y efectos cancerígenos.
• Hongos del género Rhizopus son capaces de sintetizar productos útiles para el hombre.

Morfología de los Hongos

Los hongos se clasifican en dos clases principales: mohos y levaduras. Poseen un cuerpo vegetativo constituido por elementos filamentosos que pueden ser continuos o tabicados, denominado micelio.

• El micelio de algunos hongos está constituido por células con uno o dos núcleos, y en otros es multinucleado.
• Se denomina hifas a las ramas individuales que se entrecruzan para constituir el micelio.
• Las hifas del micelio aéreo producen células reproductoras o esporas, que pueden ser de origen asexual o sexual. Estas hifas reciben la denominación general de cuerpos fructíferos.

Reproducción Asexual

La reproducción asexual es la que presenta la gran mayoría de los hongos y puede ocurrir de tres formas:

1. Esporulación
2. Fragmentación de hifas
3. Gemación de células

Estudios de Laboratorio y Diagnóstico

Condiciones de Cultivo

Los hongos suelen cultivarse a temperatura ambiente (20-25 ºC) o a un máximo de 37 ºC, con un pH de 5,5-6,5. Los medios de cultivo comunes incluyen el agar dextrosa de Sabouraud y el medio de Pensilvania, siempre en condiciones de aerobiosis.

Dermatofitos

Los dermatofitos son clasificados como hongos imperfectos debido a que solo se ha observado su estado de reproducción asexual. Existen tres géneros principales:

• Microsporum
• Trichophyton
• Epidermophyton

Solo los dos primeros géneros tienen la capacidad de provocar infecciones en los animales. Estos hongos hidrolizan una proteína estructural de la piel, pelo y uñas denominada queratina, generando micosis superficiales.

Métodos para el Diagnóstico en Laboratorio de los Dermatofitos

El diagnóstico se realiza mediante los siguientes pasos:

1. Se debe examinar la muestra en la oscuridad con una lámpara de Wood para averiguar si existe fluorescencia.
2. La muestra deberá calentarse ligeramente durante unos 10 minutos para luego investigar la presencia de artrosporas (al 10% o al 20%).
3. Los pelos y raspados de la piel deberán observarse en preparaciones con una solución de NaOH.
4. Si se han observado artrosporas, se siembra la muestra en agar dextrosa de Sabouraud.

Cuantificación Microbiana: Técnicas de Recuento

Definición de Recuento

El recuento es el procedimiento que permite determinar el número de microorganismos presentes en una muestra.

Tipos de Recuento según la Viabilidad

Recuento de Viables

Permite determinar el número de células vivas presentes en una muestra.

Recuento de Totales

Permite determinar el número de células vivas y muertas presentes en una muestra.

Tipos de Recuento según la Metodología

Recuento Directo

Cuenta el número de células directamente al microscopio.

Recuento Indirecto

Cuenta el número de células de una muestra por determinación de alguna variable que refleje el crecimiento de los microorganismos, como por ejemplo, la presencia de colonias o la turbidez.

Recuentos Directos

Recuento de Breed

Determina el número de células totales presentes en una muestra.

Fórmula: Nº cél/ml = X cél/campo × 3000 × 100

Recuento con cámara de Petroff-Hausser (Hematocitómetro)

Determina el número de bacterias totales presentes en una muestra.

Fórmula: Nº cél/ml = X cél × 25 (células en 1 mm²) × 50 (células por mm³) × 1000 (células por ml, cm³)

Recuentos Indirectos

Recuento en Placas

A partir del número de colonias se puede calcular la cantidad de células viables de la muestra. El resultado se expresa en Unidades Formadoras de Colonias por mililitro (UFC/ml).

Fórmula: Nº UFC/ml = X colonias × FD (1/dilución) × 1/inóculo

Donde: Dilución = V_inóculo / V_total

Método Turbidimétrico

Consiste en la medición de la densidad óptica, permitiendo fabricar la curva de crecimiento correspondiente.

Recuento de Diluciones en Tubos (Número Más Probable - NMP)

Permite determinar el número de microorganismos viables sembrados en series de 3 o 5 tubos por dilución.