Fundamentos de Medios de Cultivo y Protocolos de Bioseguridad en Laboratorio

Requerimientos de los Medios de Cultivo

Requerimientos Nutricionales

• Fuentes de Carbono: Dependiendo de la fuente utilizada, se determinará el metabolismo del microorganismo.
• Fuentes de Nitrógeno: Normalmente proteínas, péptidos o aminoácidos, incluyendo la peptona (no energéticos).
• Fuentes de Azufre: Mayoritariamente en forma de sulfatos, aunque también puede provenir de aminoácidos.
• Fuentes de Fósforo: En forma de fosfatos.
• Iones Metálicos:
  • Macronutrientes: Cuando se requieren en concentraciones de g%.
  • Micronutrientes: Cuando se requieren en concentraciones de mg%.
• Factores de Crecimiento: Componentes necesarios para el crecimiento que no son sintetizados por el microorganismo.
• Factores de Arranque: Permiten al microorganismo salir de la fase de latencia.
• Factores Inhibidores e Indicadores Colorantes: Sustancias cuya forma ionizada tiene un color distinto a la no ionizada.

Condiciones Fisicoquímicas del Cultivo

• Temperatura Óptima: La temperatura ideal a la que crece un organismo.
  • Psicrófilos: <15ºC
  • Psicrótrofos: 20-30ºC
  • Mesófilos: 20-45ºC
  • Termófilos: >45ºC
  • Hipertermófilos: 80-113ºC
• Grado de Humedad: La conservación se realiza a menudo mediante liofilización (eliminación de agua y humedad).
• pH: (Acidófilos o Basófilos). La mayoría de las bacterias crecen a pH 7, aunque los hongos prefieren un pH entre 4 y 6.
• Presión Osmótica: Los organismos que toleran altas concentraciones salinas se denominan halófitos.
• Concentraciones de Oxígeno: Aerobios, anaerobios, microaerófilos, anaerobios obligados, anaerobios facultativos o aerotolerantes.

Clasificación de los Medios de Cultivo

Según su Utilización

• Medios Base o Generales: Sin exigencias nutritivas especiales.
• Medios Enriquecidos: Medios generales con sustancias adicionales.
• Medios Diferenciales: Permiten diferenciar entre grupos de bacterias y facilitan su identificación.
• Medios Selectivos o de Aislamiento: Favorecen el crecimiento de organismos particulares.
• Medios de Identificación: Contienen sustancias (como indicadores de pH) que permiten la identificación específica.
• Medios de Aislamiento y Conservación.

Según su Composición

• Naturales: Contienen compuestos orgánicos; las concentraciones pueden variar.
• Semisintéticos: Incluyen compuestos orgánicos y otros sintéticos.
• Complejos: Preparados a partir de tejidos.

Según su Presentación

• Deshidratados o Liofilizados.
• Medios Preparados.
• Líquidos.
• Sólidos (en frasco o botella, tubo —pico de flauta, horizontal—, o placa).

Según su Consistencia

• Líquidos.
• Semisólidos o Fluidos (<1% de agar).
• Sólidos (inicialmente sólidos).
• Inicialmente Líquidos.
• Reversibles o Irreversibles (los reversibles se pueden volver a calentar para solidificar).

Manejo de Muestras y Gestión de Residuos en el Laboratorio

Preparación de Muestras para el Laboratorio

1. Embalar de forma que se evite la rotura o el deterioro.
2. Identificar con una etiqueta de papel bien fijada para evitar su pérdida.
3. Realizar un informe de muestreo. El informe debe incluir datos que faciliten la obtención de resultados.
4. Las muestras preparadas, etiquetadas y con su informe, se precipitan.

Descontaminación y Eliminación de Material Infectado

Existen tres métodos principales:

• Esterilización en autoclave.
• Incineración.
• Desinfección química.

Recipientes para Desechar Material Infectado

1. Cestos y Bolsas de Un Solo Uso (Para Cultivos y Muestras)

• Deben tener fondo macizo para evitar goteos.
• Nunca deben llenarse por completo.
• Los cestos y bolsas de un solo uso deben tener colores codificados.

2. Pipeteros (Para Pipetas Graduadas Recuperables)

• Deben ser de polipropileno o de goma, y suficientemente altos.
• Se debe añadir un detergente compatible para facilitar la limpieza.

3. Vasijas o Tarros de Desechos (Para Material Pequeño)

• Se usan para portaobjetos, cubreobjetos, pipetas y otros materiales de pequeño tamaño.
• Es preferible que no sean de vidrio normal, ya que se rompen fácilmente.
• Todas las vasijas se vacían una vez al día, aunque hayan recibido poco material.

4. Bolsas de Plástico para Materiales Incinerables

• Deben ser de colores codificados.
• Se eliminan directamente en el incinerador.