Fundamentos de Histología: Técnicas de Tinción y Colorantes

Fundamentos de los Colorantes

Un colorante se compone principalmente de dos elementos:

• Cromógeno: Es el responsable de otorgar color al tejido. El elemento específico que provoca la absorción de luz se denomina cromóforo. Estos pueden ser: nitrosos, azoicos, derivados de la antroquinona, de la acridina, de las iminas quinónicas, del difenilmetano y del trifenilmetano, de xanteno y de las talocianinas.
• Auxocromo: Posibilita la unión del colorante al tejido. Suele ser un grupo ionizante que reacciona de forma covalente con los iones metálicos o con el sustrato.

Coloraciones Histológicas de Conjunto

• Eosina: Colorante ácido con carga eléctrica negativa (aniónico o citoplasmático). Las sustancias que atraen eléctricamente los colorantes ácidos se denominan acidófilas.
• Hematoxilina: Colorante básico con carga eléctrica positiva (catiónico). También se conoce como colorante nuclear, pues tiene afinidad por los ácidos nucleicos (ADN y ARN). Las sustancias teñidas por los colorantes básicos son basófilas.

Propiedades de la Eosina

El nombre proviene del griego Eros (amanecer), debido a su color rosado semejante a la aurora.

• Solubilidad: Soluble en alcohol y sustancias alcalinas; insoluble en agua, benceno y cloroformo.
• Mecanismo: Es un colorante ácido que tiñe sustancias básicas. Su acidez se basa en su polaridad negativa, que permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva.
• Aplicación: Tiñe orgánulos del citoplasma, colágeno y fibras musculares.
• Resultado: Produce un color rosado-anaranjado y es fuertemente fluorescente.

Valoración de los Resultados y Errores Comunes

Los errores derivan de un procesamiento inadecuado del tejido y pueden causar artefactos durante la observación:

• Exceso de alcohol o agua: Resulta en tonos más claros y una pobre definición de las estructuras citoplasmáticas.
• Arrastre de reactivos: Si el agua entra en el alcohol tras la eosina y no se cambian los reactivos, esta agua se arrastra a los xilenos. Al observar, la eosina se filtra, dando una imagen de bruma rosa.
• Efecto en la hematoxilina: El exceso de agua provoca que la hematoxilina sea menos efectiva.

Recomendación: Para evitar estos errores, es fundamental garantizar cambios frecuentes de reactivos siguiendo las indicaciones del fabricante sobre la tolerancia de las muestras.

Coloraciones para Lípidos

• Oil Red O: Tiñe la grasa neutra de color rojo y los núcleos de azul-púrpura.
• Azul Nilo: Permite diferenciar entre grasas neutras y ésteres de colesterol frente a ácidos grasos libres y fosfolípidos. Tiñe los ácidos grasos de color azul a verde azulado.

Coloración para Glucógeno

El glucógeno es un polisacárido de reserva energética formado por cadenas ramificadas de glucosa, presente en mayor cantidad en el hígado y en menor medida en el músculo.

• Coloración de Schiff (PAS): Permite la tinción de componentes celulares que contienen hidratos de carbono. Se basa en el ácido periódico de Schiff, que oxida los grupos oxhidrilo de dos carbonos cercanos formando grupos aldehídos, y en la leucofucsina, un colorante incoloro que se torna rojo al contacto con dichos aldehídos.

Coloraciones para Mucina y Fibrina

Mucina

Proteína de alto peso molecular, altamente glicosilada, con capacidad de formar geles y componente clave en la mayoría de las secreciones. Se tiñe con: PAS, Azul Alcián y Carmín de Mayer.

Fibrina

Proteína fibrilar derivada del fibrinógeno con capacidad de formar redes tridimensionales para la coagulación. Se encuentra aumentada en sangre y orina en ciertas neoplasias y puede actuar como marcador tumoral. Se tiñe de rojo con eosina, amarillo con el colorante de Van Gieson o mediante la técnica de Weigert.