Cinética enzimática, pepsina y determinación enzimática del ácido úrico

Laboratorio: Cinética Enzimática y Metabolismo

1. Ejercicio de Espectrofotometría

1. Si el coeficiente de extinción molar de una sustancia es 6000, ¿cuál será la absorbancia para una solución 2 mM?

2. Fundamento de la Práctica de Factores Enzimáticos

Los biocatalizadores específicos sintetizados por el organismo, llamados enzimas, son proteínas que intervienen en las reacciones biológicas, acelerando la velocidad de reacción hasta alcanzar su punto de equilibrio. Las enzimas son sumamente específicas en las reacciones que catalizan y en los compuestos (llamados sustratos) sobre los que actúan.

La cinética enzimática es el estudio del comportamiento de la velocidad en reacciones catalizadas por enzimas. La velocidad a la que procede una reacción enzimática está controlada, en parte, por las concentraciones de la enzima y el sustrato. A medida que progresa la reacción, aumenta la concentración de los productos a expensas de la desaparición de los correspondientes sustratos, en tanto que la concentración de la enzima no se altera.

Actividad Enzimática

La reacción se representa como: [E] + [S] → [E-S] → [E] + [P]

Factores que modifican la actividad enzimática

• Concentración de sustrato
• Concentración de enzima
• pH del medio
• Influencia de la temperatura (T°)
• Efecto de inhibidores y activadores

Degradación de albúmina por pepsina

En la práctica observaremos la degradación de albúmina por la pepsina:

• La digestión de las proteínas se inicia en el estómago gracias a la acción conjunta del ácido clorhídrico y de la pepsina.
• La pepsina se encuentra en estado inactivo y el ácido clorhídrico ayuda a la activación de esta enzima.
• La pepsina se produce en el estómago y actúa sobre las proteínas degradándolas (desdoblando proteínas y péptidos), rompiendo los enlaces peptídicos y proporcionando péptidos.

3. Formación y Determinación del Ácido Úrico

El ácido úrico es un compuesto orgánico de carbono, nitrógeno, oxígeno e hidrógeno. Su fórmula química es C₅H₄N₄O₃.

Es un ácido débil producido en el hígado, músculos, intestinos, riñones y endotelio vascular, como producto final del catabolismo de las purinas (adenina y guanina) mediante la acción de la enzima xantina oxidasa.

Determinación enzimática

Su determinación se realiza utilizando dos enzimas:

• Uricasa: Transforma el ácido úrico en alantoína.
• Peroxidasa (POD): Con 4-aminofenazona (4-AF) forma quinonimina de color rojo.

Reacciones:

Ácido úrico + 2H₂O + O₂ → (Uricasa) → Alantoína + H₂O₂

2H₂O₂ + 4-AF → (POD) → Quinonimina (roja)