Exploración Detallada de Cultivos Celulares y Microbianos: Tipos, Aislamiento y Crecimiento

Tipos de cultivos:

• Cultivo puro o axénico: Un cultivo que solamente contiene la célula o producto de interés. Es decir, solamente contiene una única cepa de un microorganismo.
• Cultivo mixto: Contiene otras sustancias que no son de interés en la muestra.

Tipos de medios de cultivo:

• Líquido: Sin agar-agar, en tubos de ensayo esterilizados.
• Sólido: Alta concentración de agar-agar. Puede ser en placa o en tubo esterilizados.
• Semisólido: Concentración de agar de <3g/l
• General: Para todo tipo de microorganismos
• Enriquecido: Contiene sustancias que inhiben el crecimiento de los microorganismos no deseados
• Enriquecimiento: Contiene sustancias que favorecen el crecimiento de microorganismos deseados
• Selectivo: Inhibe el crecimiento de ciertos microorganismos
• Prerreducido: Reduce el oxígeno para anaeróbicos.
• Diferencial: Diferencia unos MO de otros, para estudiar sus propiedades fisiológicas
• De transporte: Medio no nutricional, que se utiliza en la recogida, transporte y conservación de muestras, evitando daños por oxidación.

Técnicas de Aislamiento

Aislamiento por agotamiento: Se siembra la mitad de la placa con un asa, se voltea y se siembra un octavo a partir de la mitad, luego otro octavo a partir del anterior y solo uno más a partir de este último.

Aislamiento por dilución: Se hacen disoluciones 1:10 de nuestra muestra con nuestro organismo de interés todas las veces que hagan falta hasta conseguir una disolución con 0 colonias. Se extrae el número de colonias utilizando un factor de dilución.

Fases del Crecimiento Microbiano

Crecimiento microbiano, fases:

• Fase de latencia: Fase de adaptación al medio, crecimiento casi nulo, se interpreta como el tiempo necesario para sintetizar las enzimas presentes en el medio.
• Fase de crecimiento exponencial: Si no hay limitaciones, crecimiento de las células, aumentando la OD.
• Fase estacionaria: Debido al consumo de nutrientes del medio y a la creación de subproductos tóxicos, el crecimiento se detiene y se vuelven a adaptar a las nuevas condiciones del medio.
• Fase de muerte: El crecimiento es inviable y cesa.

Los factores que intervienen son: Extrínsecos: Temperatura, Humedad, Presión. Intrínsecos: pH, nutrientes, agua, subproductos, etc.

Cultivos Celulares

Un cultivo celular es el conjunto de técnicas de aislamiento de células y obtención de poblaciones celulares in vitro, manteniendo sus propiedades fisiológicas, biológicas y genéticas.

Cultivo primario: Cultivo de células extraídas directamente del organismo y puestas en un medio de cultivo artificial.

Línea celular: Cultivo celular que se realiza a partir de una segunda generación de un cultivo primario, que tiene alta capacidad de multiplicarse. Al final, en ese cultivo van a acabar conviviendo células de diferentes generaciones, con algunas propiedades ligeramente diferentes. Son aneuploidias en comparación con el cultivo primario y tienen la capacidad de multiplicación ilimitada.

Un subcultivo es cuando un cultivo primario llega a su máxima proliferación, que se debe extraer una parte de las células y ponerse en otro cultivo.

Crecimiento celular: Mono capa o en suspensión.