Electroforesis de Proteínas Séricas: Agarosa y Acetato de Celulosa

Electroforesis en Gel de Agarosa

1. Fracciones de proteínas séricas humanas: Las proteínas séricas humanas se separan en **6 fracciones** en gel de agarosa.
2. pH de la técnica: Se realiza a un **pH de 8.5**.
3. Fijación de las proteínas separadas: Se fijan mediante un **flujo de aire caliente** o una **mezcla de ácido-alcohol**.
4. Colorante utilizado: Se usa una **solución de Negro Amido**.
5. Eliminación del exceso de colorante: Se elimina con una **solución ácida**.
6. Evaluación de las fracciones proteicas: Se evalúan **visualmente** o por **densitofotometría**.
7. Datos de la valoración visual: Permite la **detección de anomalías en el perfil** proteico.
8. Datos de la valoración densitométrica: Proporciona la **cuantificación relativa precisa de las fracciones individuales**.
9. Utilidad de la electroforesis en gel de agarosa: Se emplea en la **investigación de anomalías proteicas** en suero y otros fluidos biológicos.
10. Principio de separación en fracciones: Las proteínas se separan de acuerdo con su **carga neta** a un pH dado y según su **tamaño**.
11. Finalidad del gel de agarosa: Actúa como **medio de soporte** en la separación de proteínas.
12. Indicadores de deterioro de geles: **Cristales en la superficie**, **crecimiento fúngico o bacteriano**, y **cantidad excesiva de líquido** en el estuche del gel.
13. Descarte del tampón: Se desecha por **turbidez** o **contaminación microbiana**.
14. Finalidad de los aplicadores: Sirven para la **aplicación de muestras**.
15. Tipo de muestras para la electroforesis en gel: Principalmente **plasma**.
16. Fracción Beta-2 y su observación: Corresponde al **complemento C3**. Se puede observar aumentada en **sueros hemolizados** con menos de **3 días** de antigüedad.
17. Inconvenientes de muestras descongeladas: Presentan **marcas de aplicación** debido a la **desnaturalización de las proteínas**.
18. Inconvenientes de muestras refrigeradas: Algunos sueros pueden volverse **viscosos**.
19. Finalidad de la azida sódica: Mejora la **estabilidad de almacenamiento** al congelar las muestras de suero.
20. Muestras a desechar: **Muestras de suero hemolizadas** y **muestras de plasma**. En el plasma, la banda de **fibrinógeno (Fb)** puede confundirse con una **banda de inmunoglobulina (Ig) monoclonal**.
21. Control de calidad con gel de agarosa: Se realiza incluyendo un **suero valorado** en cada **análisis de muestra de suero**.

Electroforesis en Acetato de Celulosa

1. Comportamiento de las proteínas en medio neutro: Las proteínas se comportan como **moléculas no cargadas** porque no hay un exceso de protones libres para captar.
2. Carga de las proteínas según el pH: En medio **ácido**, las proteínas adquieren carga **positiva**; en medio **alcalino (básico)**, adquieren carga **negativa**.
3. Adquisición de carga negativa en esta técnica: Las proteínas del suero adquieren carga **negativa** al depositarse sobre una **solución alcalina**.
4. Dirección de desplazamiento de las proteínas: Las proteínas se desplazan **hacia el ánodo (+)**, ya que se han cargado negativamente.
5. Denominación del proceso de desplazamiento: Se denomina **migración de proteínas**.
6. Proteínas con mayor avance hacia el ánodo: Aquellas con **mayor carga electronegativa** serán atraídas con más fuerza.
7. Denominación de las bandas separadas: Se denominan **fracciones**.
8. Medio de separación de fracciones: Se utiliza **acetato de celulosa**.
9. Número de fracciones en suero normal: Se obtienen **5 fracciones**.
10. Diferencia de fracciones entre plasma y suero: En el **plasma** se obtienen **6 fracciones** (incluyendo el **fibrinógeno**), mientras que en el **suero** se obtienen **5**. El fibrinógeno se sitúa entre las fracciones beta y gamma.
11. Soporte utilizado: Se utilizan **tiras de acetato de celulosa**.
12. Tampón utilizado: Se emplea **veronal sódico-Tris-barbital** para evitar que las proteínas **precipiten** o se **desnaturalicen**.
13. Colorante utilizado: El **Negro Amido** se utiliza para poner de manifiesto las fracciones separadas.
14. Motivo de inmersión en tampón: Las tiras de acetato se sumergen en un tampón para que las proteínas **adquieran carga**.
15. Se añade **tampón** en la cubeta para que la carga se mantenga durante la separación.
16. La **corriente eléctrica** atraviesa el soporte desde el **cátodo (-)** al **ánodo (+)**.
17. La muestra se coloca **próxima al cátodo** porque las proteínas están cargadas negativamente.
18. Cálculo del porcentaje de proteínas por fracción: Se puede conocer el porcentaje de proteínas de cada fracción si se conoce la **concentración de proteínas totales en el suero**.
19. Utilidad del proteinograma: Sirve para detectar **alteraciones proteicas del suero**.
20. Modificación del proteinograma en hipogammaglobulinemia: Disminuye la **fracción de las gammaglobulinas**.
21. Proteinograma en casos de malnutrición: Generalmente, se observa una **disminución en todas las fracciones** proteicas.