Cuantificación y Caracterización de Proteínas: Métodos Avanzados
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Métodos Basados en la Determinación del Contenido de Nitrógeno
| Kjeldahl | Dumas | |
|---|---|---|
| Etapas | Digestion con ácido sulfúrico Neutralización con NaOH y liberación de NH3 Destilación Valoración sobre ácido débil (HCl o ácido sulfúrico) o sobre ácido débil valoración indirecta con NaOH | Pirólisis por combustión-oxidación a 700-1000ºC en presencia de CuO. Reducción de óxidos de nitrógeno en presencia de Cu Separación y detección |
| Medición | Nitrógeno orgánico | Nitrógeno orgánico e inorgánico |
| Tiempo | horas | minutos |
| Calidad | Precisión y exactitud altas | Precisión y exactitud altas |
| Economía | Equipamiento barato, coste por análisis caro | Equipamiento caro, coste por análisis barato. |
| Residuos | Reactivos, catalizadores | Gases |
| Automatización | Menor | Mayor |
Otros Métodos de Cuantificación de Proteínas
- Contenido parcial de proteínas en mezcla
- Métodos químicos:
- Biuret: Formación de complejos estables entre iones cúpricos y enlaces peptídicos, con un color violeta (540 nm). La absorbancia es proporcional al contenido de proteína (espectrofotometría visible).
- Lowry: Basado en la reacción de Biuret y la reducción del reactivo Folin-Ciocalteu.
- Fijación de colorantes ácidos
- Métodos físicos:
- Espectroscopía IR
- Espectrofotometría UV: Absorción de tirosina (Tyr) y triptófano (Trp).
- Fluorescencia: Fluorescencia de Tyr y Trp.
- Turbidimetría
- Nefelometría: Medición de la intensidad de la luz no dispersada/dispersada.
- Métodos químicos:
Fraccionamiento Proteico
- Según carga, tamaño y solubilidad.
- Procedimientos para separar según la solubilidad en soluciones de distinta fuerza iónica.
Diferenciación Proteica
- Aplicación: Para diferenciar las materias primas, la especie de origen y para productos no tratados térmicamente.
- Tipos:
- Técnicas electroforéticas: Separación de moléculas en disolución por un campo eléctrico. La migración depende de la masa y carga eléctrica. Se realiza en gel sólido o semi-sólido.
- Técnicas inmunológicas: Basadas en la antigenicidad de ciertas proteínas. Inmunodifusión y ELISA (uso de anticuerpos marcados con enzimas como la fosfatasa alcalina).
- Espectroscopía de masas MALDI-TOF: Separación de proteínas por carga y masa, identificación por comparación con bases de datos.
Composición en Aminoácidos de las Proteínas
- Hidrólisis de la proteína: Hidrólisis ácida o alcalina, mediante oxidación con ácido perfórmico + hidrólisis alcalina.
- Determinación de aminoácidos: Cromatografía en capa fina o en columna con intercambio iónico, HPLC, GC.
Valor Nutritivo de las Proteínas
- Composición en aminoácidos, coeficiente de digestibilidad, valor biológico y la utilización neta proteica.